噻唑蓝;MTT

产品简介：

噻唑蓝（MTT）是一种生物染料。常用于基于MTT检测方法的细胞活力、细胞增殖或细胞毒性检测。因为MTT具有正电荷，它可以穿过细胞膜并被线粒体还原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有机溶剂。脱氢酶的检测，染色法。
分子式：C₁₈H₁₆BrN₅S 分子量：414.32
别名：噻唑蓝(MTT)；3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide, MTT, Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide
物理性状及指标：
外观：……………………黄色或橙色固体
纯度：……………………≥98%
溶解性：…………………5mg/ml溶于水、盐溶液、培养基；溶于甲醇、DMSO，乙醇(20 mg/ml)
熔点: ………………………195℃。
干燥失重: …………………<1.0%

储存条件：

2-8°C，避光防潮密闭干燥

运输条件：

常温运输

用途及描述：

科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。MTT产生淡黄色溶液，通过活细胞的线粒体脱氢酶转化为深蓝色甲瓒。用酸化的异丙醇溶解蓝色晶体，并在570nm处比色测量强度。

1. 药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；
2. 细胞增殖及细胞活性测定。

使用方法推荐

• 普通MTT法实验步骤（仅供参考）：
  其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
  1. 接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.
  2. 培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
  3. 呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。
  4. 比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
• MTT配制方法
  通常MTT配成的终浓度为5mg/ml，须用PBS（磷酸缓冲液）或生理盐水做溶剂。（市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g）
  1. 对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。
     具体做法：
     • 预先在50ml离心管(没有的话，可用培养瓶替代)加入20ml的PBS；
     • 从中先吸取500-1000ul的PBS装入含MTT的小管中，吹打若十次后将其移入50ml离心管，然后再混匀；
     • 可以重复几次以使小管中的MTT不残留于管内；
     • 将MTT完全混匀后，用0.22um滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度；
     • 如果按细胞培养板每孔需加10ul计算，一般每96孔板约需1ml，所以分装时可考虑每管分装1ml。
  2. 对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加；
  3. 配制MTT时用PBS溶解，也有人用生理盐水配，60度水浴助溶。

【注意】

1. 在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
2. 配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。
3. MTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20℃度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
4. MTT有致癌性，用的时候小心，一定要带手套。有条件可以采用我司推荐的MTT试剂盒，价格合算后已经相当亲民。
5. 我司产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。
6. 部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。