Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒（3-12%预制胶）

产品描述：

Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）的原理是：用温和去污剂（如DDM，digitonin）将分子量在10 kDa-10M kDa范围的蛋白质复合物从生物样品（胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等）中以近似天然的状态分离出来，并通过电泳进行分析的技术。Blue Native PAGE（BN-PAGE）利用考马斯亮蓝G-250代替SDS与蛋白结合而使其带负电荷，根据蛋白分子量不同在PAGE胶中得到分离，可以分离碱性蛋白（pI＞7）；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是电泳缓冲液中不加入任何染料，电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态，只适合于酸性蛋白（pI＜7）的分离。CN-PAGE的分辨率要低于BN-PAGE。

传统的Blue/Clear非变性凝胶电泳需要试剂及染料种类繁多、成分复杂，配制过程冗杂，且经常会出现条带不美观、不理想的情况。Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒提供了BN/CN-PAGE电泳过程的所有成分，使用方便。电泳后的样品可直接用于考染、银染、Western杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化和蛋白活性检测等分析实验，也可直接用于电洗脱制备蛋白。本试剂盒中预制胶的梳孔数为12孔，最大上样量为50μl。

产品优势：

√  一站式，提供了BN/CN PAGE电泳的所有组分，用户不需要预先配制，操作简便；

√  用于分离分子量在10 KDa-10M KDa的蛋白复合体，蛋白检测范围广；

√  具有维持天然蛋白质构象的能力，适合用于难以在变性条件下分析的蛋白质，如膜蛋白复合体和大分子量蛋白复合体；

√  电泳分辨率高，蛋白条带清晰、平直；

√  电泳速度快，使实验过程短时高效。

保存条件：各组分按照标签温度保存，自生产之日起12个月有效。

运输条件：湿冰运输（按季节）。

操作方法：详见说明书。

注意事项：

1. 在Blue Native PAGE凝胶电泳期间，电流下降至低于1 mA很常见。有些电泳电源如伯乐电源有负载检查功能，电流过低（低于4 mA）会认为没有负载，报错E1错误代码，终止电泳。可以调高电压高于300 V，使得电流不要低于4 mA。
2. 预制胶不能置于0℃以下冷冻，置于4℃冰箱时也不要紧靠箱胆或门胆，否则凝胶会冻裂或产生气泡。
3. 请确保使用兼容的电泳槽，内外槽之间液体的泄露会导致蛋白迁移率低。
4. 1×BN/CN电泳缓冲液可以回收，回收后可作为外槽的电泳液重复使用1-2次。但为了取得最佳的电泳效果，应使用新鲜配制的电泳液。
5. 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液必须完全融化混匀后再使用。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服和佩戴一次性手套。

数据展示：

图1. BN-PAGE 3-12%和4-16%预制胶电泳考染图

图中样品为植物类囊体膜蛋白及非变性蛋白Marker（MA0352和MA0353）；

恒压120V 2 h，冰浴电泳。

图2. BN-PAGE 3-12%预制胶WB检测结果图

图3. BN-PAGE 4-16%预制胶WB检测结果图

样品：肝脏组织全蛋白及胞浆蛋白；

电泳结束后，使用Meilunbio^® Western快速转膜液（MA0121）进行转膜，稳流400 mA ，45 min，冰浴；

转膜后将PVDF膜用无水甲醇浸泡10分钟至膜无色；

封闭：无蛋白快速封闭（MA0406），室温，30分钟；

一抗：兔单抗GAPDH，1：10000，4℃过夜孵育；

二抗：羊抗兔IgG-HRP，1：10000，RT孵育1 h；

ECL检测：Meilunbio^®飞克特超敏ECL发光液（MA0186）。

Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒系列产品：