产品描述:
Blue/Clear Native PAGE(BN/CN-PAGE)的原理是:用温和去污剂(如DDM,digitonin)将分子量在10 kDa-10M kDa范围的蛋白质复合物从生物样品(胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等)中以近似天然的状态分离出来,并通过电泳进行分析的技术。Blue Native PAGE(BN-PAGE)利用考马斯亮蓝G-250代替SDS与蛋白结合而使其带负电荷,根据蛋白分子量不同在PAGE胶中得到分离,可以分离碱性蛋白(pI>7);Clear Native PAGE(CN-PAGE)是电泳缓冲液中不加入任何染料,电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态,只适合于酸性蛋白(pI<7)的分离。CN-PAGE的分辨率要低于BN-PAGE。
传统的Blue/Clear非变性凝胶电泳需要试剂及染料种类繁多、成分复杂,配制过程冗杂,且经常会出现条带不美观、不理想的情况。Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒提供了BN/CN-PAGE电泳过程的所有成分,使用方便。电泳后的样品可直接用于考染、银染、Western杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化和蛋白活性检测等分析实验,也可直接用于电洗脱制备蛋白。本试剂盒中预制胶的梳孔数为12孔,最大上样量为50μl。
产品优势:
√ 一站式,提供了BN/CN PAGE电泳的所有组分,用户不需要预先配制,操作简便;
√ 用于分离分子量在10 KDa-10M KDa的蛋白复合体,蛋白检测范围广;
√ 具有维持天然蛋白质构象的能力,适合用于难以在变性条件下分析的蛋白质,如膜蛋白复合体和大分子量蛋白复合体;
√ 电泳分辨率高,蛋白条带清晰、平直;
√ 电泳速度快,使实验过程短时高效。
保存条件:各组分按照标签温度保存,自生产之日起12个月有效。
运输条件:湿冰运输(按季节)。
操作方法:详见说明书。
注意事项:
- 在Blue Native PAGE凝胶电泳期间,电流下降至低于1 mA很常见。有些电泳电源如伯乐电源有负载检查功能,电流过低(低于4 mA)会认为没有负载,报错E1错误代码,终止电泳。可以调高电压高于300 V,使得电流不要低于4 mA。
- 预制胶不能置于0℃以下冷冻,置于4℃冰箱时也不要紧靠箱胆或门胆,否则凝胶会冻裂或产生气泡。
- 请确保使用兼容的电泳槽,内外槽之间液体的泄露会导致蛋白迁移率低。
- 1×BN/CN电泳缓冲液可以回收,回收后可作为外槽的电泳液重复使用1-2次。但为了取得最佳的电泳效果,应使用新鲜配制的电泳液。
- 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液必须完全融化混匀后再使用。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服和佩戴一次性手套。
数据展示:
图1. BN-PAGE 3-12%和4-16%预制胶电泳考染图
图中样品为植物类囊体膜蛋白及非变性蛋白Marker(MA0352和MA0353);
恒压120V 2 h,冰浴电泳。
图2. BN-PAGE 3-12%预制胶WB检测结果图
图3. BN-PAGE 4-16%预制胶WB检测结果图
样品:肝脏组织全蛋白及胞浆蛋白;
电泳结束后,使用Meilunbio® Western快速转膜液(MA0121)进行转膜,稳流400 mA ,45 min,冰浴;
转膜后将PVDF膜用无水甲醇浸泡10分钟至膜无色;
封闭:无蛋白快速封闭(MA0406),室温,30分钟;
一抗:兔单抗GAPDH,1:10000,4℃过夜孵育;
二抗:羊抗兔IgG-HRP,1:10000,RT孵育1 h;
ECL检测:Meilunbio®飞克特超敏ECL发光液(MA0186)。
Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒系列产品:
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
MA0469 | Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒(3-12%预制胶) | 10T/盒 |
MA0470 | Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒(4-16%预制胶) | 10T/盒 |
MA0471 | 10×Native PAGE电泳缓冲液粉末 | 500 mL(10×)/包 |
MA0472 | 4×Native PAGE蛋白上样缓冲液 | 1 mL*10/包 |