产品描述:
本试剂盒是一款以鲁米诺(Luminol)作为化学发光底物的低飞克极超敏的ECL化学发光试剂盒。其工作原理是:以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体直接或间接结合膜上的目的蛋白,在洗膜后加入ECL工作液,在其碱性环境下,鲁米诺由HRP催化发光,然后通过X胶片或者化学发光成像系统来检测结果。
本试剂盒使用了优化的增强剂和氧化剂,提高了试剂盒的稳定性和检测灵敏度,对抗原的最低检测限可达到低飞克级。在Western Blot实验中,一抗(1mg/mL)储存液可稀释1:5,000至1:100,000倍,二抗(1mg/mL)储存液可稀释1:100,000至1:500,000倍,发光信号强且较持久。Meilunbio®低飞克极超敏ECL发光液特别适用于丰度较低或痕量目的蛋白的检测,对于常规的WB或者丰度较高的蛋白检测,可选择使用Meilunbio®飞克特超敏ECL发光液(美仑货号:MA0186)。
产品优势:
- 灵敏度极高:可检测低飞克级抗原。
- 信噪比高:样品发光信号强,条带清晰且背景值低。
- 发光稳定性好:可重复曝光。
- 工作液稳定性好:4℃条件下,6h内工作液与现配的一致。
- 降低成本:可使用更高的抗体稀释倍数,大大节省抗体。
实验数据:
图1.使用Meilunbio®低飞克极超敏ECL发光液与进口T公司West Femto发光液进行内参及非内参抗体不同浓度蛋白的WB检测结果图
操作方法:详见说明书
注意事项:
- 本ECL试剂盒灵敏度高,需要优化好样品上样量、凝胶类型、转膜方法、膜类型、封闭试剂、一抗/二抗浓度及相应孵育时间等,并按照蛋白表达丰度,参考推荐的抗体稀释比例,来获得最佳实验结果。
- 如果印迹膜上条带过亮时,建议使用我公司生产的膜再生液(MA0181)去除抗体后重新封闭孵育,并提高一抗二抗稀释比例。如果条带过暗也可将二抗稀释比例降低至1:5000至1:10,000倍,以达到最佳效果。
- 本试剂盒A液和B液不可以相互污染,否则会降低产品的使用效果。
- 各组分使用后,请拧紧瓶盖,以防污染。
- ECL工作液孵育时间不宜过长,延长孵育时间不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。
- 若想节约试剂,可适当将膜剪小,但请勿稀释发光液,因为发光过程的本质是酶促反应,使用过少的底物不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和灵敏度明显降低。
- 发光强度会随时间缓慢减弱,建议在曝光后两小时内完成实验。
- 孵育二抗后,洗膜缓冲液应避免使用叠氮钠,因为叠氮钠是HPR的抑制剂。
- 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会造成淬灭荧光,请选择高质量保鲜膜。
- 为了您的安全和健康,请穿戴实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
2-8℃避光保存,自生产之日起12个月有效。
运输条件:
湿冰运输(按季节)
常见问题解决方案:
遇到的问题 | 原因分析 | 推荐解决方法 |
胶片出现反影 |
反应系统中HRP量过多 |
稀释HRP标记物 |
膜上出现棕色或
黄色条带 |
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暗室中观察到强烈发光 | ||
条带有空斑 | ||
发光信号持续时间短 | 保鲜膜、显影液或定影液污染 | 使用优质试剂耗材,规范操作,避免污染 |
反应系统中HRP量过少 | 增加HRP标记物 | |
胶片无条带显现或者信号较弱 | 蛋白质表达量低或降解 | 适当增加上样量或提高抗体的使用浓度 |
转膜的效率低 | 适当增加转膜时间或提高转膜效率,用预染Marker判断 | |
膜的选择不合适 | 小蛋白更适合于PVDF膜 | |
抗原、抗体量少或不匹配 | 增加抗原/抗体量或选择合适抗原/抗体 | |
X光胶片有问题 | 曝光后X光谱全黑(而非透明色),则表明胶片已完全曝光,使用新的X光片 | |
显影/定影液有问题 | 可预先曝光一张胶片进行判断,如有问题当换用新的显影/定影液 | |
曝光时间过短 | 适当的延长曝光时间 | |
高背景 | 反应系统中HRP量过多 | 稀释HRP标记物,延长封闭时间 |
抗体未清洗干净 | 增加洗膜次数 | |
封闭不完全 | 优化封闭条件 | |
使用错误的封闭剂 | 使用其他的封闭剂 | |
过度曝光 | 降低曝光时间 | |
非特异性条带 | 一抗用量过多或者特异性较差 | 减少一抗稀释比例或者更换一抗 |
SDS引起蛋白非特异性结合 | 实验流程中避免使用SDS | |
条带弥散或形状怪异 | 制胶问题 | 配胶时要保证充分混匀,均匀凝胶,并用针头将胶孔拨正吹出孔内的气泡 |
上样量大 | 上样时需保证样品量一致且适当,并且含较低的盐离子浓度 | |
电泳时电压、电流过高导致电泳液过热 | 建议使用合适的电泳条件并保持低温 | |
ECL发光液失效 | 过了保质期 | 建议更换新的ECL发光液 |
未避光保存 | 发光液中鲁米诺等成分需避光保存,否则容易失活 | |
AB液交叉污染 | 规范实验操作,吸取不同的液体需更换枪头 |