产品简介
ATP生物发光技术的原理是荧光素酶以荧光素、三磷酸腺苷(ATP)和O2为底物，在Mg2+ 存在时，能将化学能转化为光能。ATP既是荧光素酶催化发光的必需底物，又是所有生物生命活动的能量来源。在荧光素酶催化的发光反应中，ATP在一定的浓度范围内，其浓度与发光强度呈线性关系。3D细胞培养技术已经成为非常常用的研究工具，也越来越受欢迎，在基础研究和药物发现等中的应用越来越广泛，而3D培养条件下的细胞活性检测也成为一大难点。
CellTiter-Meiluncell 3D是一种基于荧光素酶系统的细胞活力检测试剂。检测试剂经优化具有更强的裂解能力，可有效渗透至3D培养形成的球状体内部，更适用于专门用于检测 3D 细胞培养产生的微组织 (microtissue) 的细胞活力。在细胞培养物中加入产品使细胞团裂解，释放出ATP，即可发出稳定的“辉光型”发光信号，信号强度与ATP的量在一定范围内成正比，间接反映样品中活细胞数量，因此产品可对活细胞数目进行定量检测。
图1. CellTiter-Meiluncell 3D试剂盒检测原理示意图
产品特点
Ø 安全操作方便快捷：无需洗涤细胞、更换或去除培养液，只需加入与细胞培养液等体积的检测试剂，振荡混匀5分钟，室温孵育25分钟后即可进行化学发光检测。
Ø 使用灵活便捷，适用范围广：既适用于少量样品的检测，也适用于大量样品的高通量筛选，以及不同方法培养出的3D细胞球活性检测。
Ø 发光强度高，信号稳定：本产品对于相同种类细胞样品的发光信号强于国外同类产品，且发光信号更加稳定。
保存条件
-20℃保存，自生产之日起12个月有效。
产品数据展示
- 不同种类3D细胞球发光亮度
方法：使用穹顶法培养不同种类细胞3D细胞球，每孔1500个细胞，培养4-6天，加入美仑及同类产品3D细胞活力检测试剂，震荡混匀5分钟后，室温孵育25分钟，使用Synergy HTX多功能酶标仪读数。
结果：我司试剂盒发光亮度高于同类产品。
图2. 不同种类3D细胞球发光亮度
- 测定样品线性范围
方法：应用美仑3D细胞活力检测试剂盒和其他同类产品对不同数量HCT-116细胞在康宁®球体微孔板中培养72h后检测细胞活性。
结果：我司试剂盒发光强度随细胞数量增多而增强，不过在发光强度与细胞数量之间的线性关系上，对于3D培养的细胞，接触抑制对细胞增殖产生的影响以及大型细胞球状体中央区域代谢活性降低或者细胞坏死的影响，会导致细胞接种培养数天后进行活力测定的化学发光信号强度和细胞的接种数量之间的关系通常为曲线，但是发光信号的强度会随着种板细胞数量的增加而升高。
图3. 不同数量HCT-116细胞在康宁®球体微孔板中培养72h后细胞状态
图4. 不同数量HCT-116细胞在康宁球形板中培养72h细胞活力检测
- 产品发光稳定性
方法：在康宁®球体微孔板中接种8000个HCT-116细胞，培养72h后，应用美仑3D细胞活力检测试剂盒和其他同类产品检测细胞活性并进行持续3小时的生物发光强度检测。
结果：我司试剂盒及同类产品对8,000个HCT-116细胞培养72小时后的化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、细胞培养时间、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
图5. 8000个HCT-116细胞培养72h化学发光稳定性
- 2D细胞检测效果
①方法：使用含10% FBS的RPMI 1640培养基，在96孔板中对HL-60细胞从100,000个HL-60细胞起始进行2倍稀释，加入美仑3D细胞活力检测试剂盒和其他同类产品震荡混匀2分钟后，室温孵育10分钟，检测发光信号。
结果：发光信号与每孔细胞数呈线性关系 (R2= 0.9999)。
图6. 不同数量HL-60细胞活力检测
②方法：使用含10% FBS的Ham’s F-12K培养基，在96孔板的4个孔中加入100μl 1*10^5 cells/ml浓度的CHO-K1细胞，加入美仑3D细胞活力检测试剂盒和美仑2D细胞活力检测试剂盒震荡混匀2分钟后，室温孵育10分钟，检测发光信号。
结果：美仑3D细胞活力检测试剂发光亮度强于2D细胞活力检测产品。
图7. CHO-K1细胞活力检测
- ATP检测
方法：使用10μM ATP标准品检测3D细胞活力检测试剂发光信号。
结果：美仑3D细胞活力检测试剂发光亮度强于同类及2D细胞活力检测产品。
图8. ATP标准品检测产品发光亮度
- 实际应用测试
方法：在康宁®球体微孔板中接种2000个HCT-116细胞，4天后，加阿霉素处理，使其终浓度为0.00001、0.00005、0.00025、0.0005、0.001M，64h后检测细胞活力。
图9. HCT-116肿瘤球经阿霉素处理细胞活力曲线