简介：链霉蛋白酶E（Pronase E）是一种从灰色链霉菌中提取的蛋白水解酶混合物。它有能力将蛋白质分解成单个氨基酸，使其适合广泛的蛋白质降解。链霉蛋白酶E至少包含细胞外丝氨酸蛋白酶在内的三种蛋白酶活性。通常情况，丝氨酸蛋白酶县广谱的底物特异性，通过分子上一个天冬氨酸，一个组氨酸，和一个丝氨酸组成的活性位点来调控。本酶选择性偏好水解谷氨酸或天冬氨酸羧基形成的肽键，常见的丝氨酸活性位点抑制剂可抑制其活性，如PMSF和DFP。链霉蛋白酶E还至少包含三种酪蛋白水解活性和一种氨基肽酶活性，这三种酪蛋白水解酶分别命名为灰色链霉菌来源蛋白酶A（Streptomyces griseus Protease A），蛋白酶B（Steptomyces gtniseus ProteaseB）和胰酶（Streptomyces gfiseus Typsin）。
别名：Pronase E；链丝菌蛋白酶E
物理性状及指标：
外观：……………………白色至微褐色粉末
溶解性：…………………DMSO：50 mg/mL；Water：10 mg/mL
酶活力：…………………＞7000U/g
【酶活力定义：1g固体酶粉（或1ml液体酶），在30℃±0.2℃、pH7.5条件下，1min水解酪蛋白产生1μg酪氨酸，即为1个酶活力单位，以U/g（u/mL）表示。】
储存条件：-20℃，避光防潮密闭干燥
运输条件：湿冰运输（按季节）
产品用途: 科研试剂，严禁用于人体。
链霉蛋白酶E的应用广泛，可应用于蛋白的大量或者完全降解、蛋白酶抑制剂的研究、热失活动力学、核酸分离、与胶原酶和胰蛋白酶联合组织消化、以及用于糖肽生产的糖蛋白纯化等。
使用方法：（来自公开文献，仅供参考）
| 消化蛋白[1] | 1、储存液制备：溶解于去离子水，配制成5-20mg/mL的Pronase E储存液，若用于DNA或RNA分离步骤，建议将溶液56℃加热处理15min，之后37℃孵育1h，此步骤能促使酶发生自消化，以去除DNase和RNase污染。之后将储存液分成单次用量，-20℃冻存，通常情况1年稳定。
2、DNA分离：直接加入DNA制备体系（含有0.5-1%SDS以打破DNA-蛋白相互作用），典型Pronase E工作浓度范围250-500μg/mL，于37℃孵育1-4h。【注意：建议工作浓度范围在250-2000μg/mL，依照具体情况而定】 3、蛋白水解：溶解约0.2μM蛋白到0.2mL 50mM碳酸氢铵缓冲液，pH8.0（或磷酸盐缓冲液，pH7.0），之后按照1%（w/w）加入Pronase E，于37℃孵育24h。根据情况，有可能需要添加4%（w/w）氨肽酶M，并于37℃再孵育18h。 |
| 分离小鼠原代造血干细胞[2] | 1、雄性或雌性小鼠被麻醉，并打开腹腔。
2、肝脏经门静脉灌注Hanks缓冲盐溶液（HBSS），然后灌注Pronase E和胶原酶。 3、用无菌镊子轻轻取出肝脏，转移到无菌培养皿中。将肝包膜分开，轻轻摇晃肝脏以释放细胞。 4、将细胞悬浮于含有Pronase E、胶原酶和DNase的溶液中，然后在37℃下消化20 min。肝细胞经50g离心3 min，两轮分离。 5、上清在450g下离心获得造血干细胞8 min，然后用18%尼基丹（Nycodenz）溶液悬浮沉淀，制备12% Nycodenz、8.2% Nycodenz和Gey’s平衡盐溶液（GBSS）密度梯度离心。 6、最终，从8.2%的Nycodenz层中纯化细胞，获得造血干细胞。 |
参考文献：
[1]. Pronase E significantly increases the amount of most of the amino acids analysed ( PE vs C ） , especially Ile, His and Thr.
[2]. Chen QT, Zhang ZY, et,al. HK1 from hepatic stellate cell-derived extracellular vesicles promotes progression of hepatocellular carcinoma. Nat Metab. 2022 Oct;4(10）:1306-1321. doi: 10.1038/s42255-022-00642-5. Epub 2022 Oct 3.
[3]. Zhao W, Xu W, et,al. Key Amino Acid Residues of Mitochondrial Transcription Factor A Synergize with Abasic (AP) Site Dynamics To Facilitate AP-Lyase Reactions. ACS Chem Biol. 2023 May 19;18(5):1168-1179. doi: 10.1021/acschembio.3c00047. Epub 2023 Mar 17.
[4]. Fang Z, Xu Y, et,al. Narirutin activates TFEB (transcription factor EB) to protect against Acetaminophen-induced liver injury by targeting PPP3/calcineurin. Autophagy. 2023 Aug;19(8):2240-2256. doi: 10.1080/15548627.2023.2179781. Epub 2023 Feb 24.
[5]. Chen S, Li S, et,al. Caspase-mediated LPS sensing and pyroptosis signaling in Hydra. Sci Adv. 2023 Jul 21;9(29):eadh4054. doi: 10.1126/sciadv.adh4054. Epub 2023 Jul 21.
【注意】
- 我司产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。
- 部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。