产品简介：
高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(辉光型高亮版)提供一种高灵敏度及信号稳定的检测系统，具有更高灵敏度和发光信号稳定的特点，发光强度最高可达30万以上，半衰期最长可达5小时以上，符合高通量检测的需求。同时高斯荧光素酶（Gaussia Luciferase，185 AA，19.9 kDa）是一种分泌型萤光素酶，Gaussia Luciferase 质粒转染细胞后，大部分 Gaussia Luciferase 可以分泌到细胞外，所以本试剂盒既可以用于细胞培养上清样品的检测，也可以用于细胞裂解样品或纯化的酶的检测，特别适用于酶活性的实时研究。
Gaussia Luciferase 产生的生物发光信号原理是腔肠素(Coelenterazine)的氧化反应，该反应不需要ATP或其他辅助因子。
反应原理如下：
注意事项：
1．检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色或黑色细胞培养板。
2．由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
3．酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测工作液以及细胞培养板平衡至室温。
4. 如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。
5．高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(辉光型高亮版)具有高发光信号及发光稳定性，发光强度最大可达30万以上。信号半衰期最长可达5小时以上。当酶表达量过低时，发光信号会降低，但信号稳定性会增强；当酶表达量过高时，信号半衰期会减少，但发光信号会增强。建议根据实际情况优化实验设计方案（如增加/减少质粒转染量），避免萤光素酶表达量过高/低。
6．Gaussia Glow-Bright Assay Substrate (100×) 配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于包装规格的情况，此时用无水乙醇把体积补足至包装规格，并混匀后即可使用。
保存条件：
-20℃避光保存，自生产之日起12个月有效。
运输条件：
干冰运输。
产品数据展示：
- GaussiaGlow-Bright Assay 发光稳定性及线性检测
方法：将Gaussia萤光素酶载体瞬时转入HEK293T细胞，24小时后收集培养上清，分别使用PWL210及B品牌同类产品，正常使用量（样品20μL+工作液50μL）及减半使用量（样品20μL+工作液25μL）检测发光情况。
结果：PWL210的发光亮度与B品牌相近，且稳定性优于B品牌。PWL210减半使用发光亮度无明显变化。PWL210线性关系良好。
图1. Gaussia萤光素酶发光强度及线性检测
- 多种细胞中Gaussia萤光素酶的检测情况
①细胞培养上清检测
方法：将Gaussia萤光素酶载体分别瞬时转入HEK293T、Vero、HCT116、CHO-K1细胞中，24小时后收集培养上清，分别使用PWL210及B品牌同类产品检测发光情况。
结果：同一种细胞内Gaussia萤光素酶检测，PWL210的发光亮度高于B品牌。Gaussia萤光素酶在HEK293T细胞中表达量最高。
图2. 多种细胞中上清Gaussia萤光素酶的检测情况对比图
左图：PWL210；右图：B品牌
②总高斯萤光素酶活性的快速检测
方法：使用不透光白板/黑板，将Gaussia萤光素酶载体分别瞬时转入HEK293T、Vero细胞中，24小时后分别向孔板内加入与培养基等体积的PWL210及B品牌同类产品工作液（培养基25μL+工作液25μL；培养基50μL+工作液50μL），室温孵育10min，检测发光情况。
结果：同一种细胞内Gaussia萤光素酶检测，工作液使用量相同时PWL210的发光亮度高于B品牌。在Vero细胞中，随着检测体系量增加，发光亮度有明显提高，效果明显优于B品牌。
图3. 多种细胞中Gaussia萤光素酶的检测情况对比图
左图：HEK293T细胞；右图：Vero细胞
- Gaussia萤光素酶稀释后检测
方法：将Gaussia萤光素酶载体分别瞬时转入HEK293T、Vero细胞中，24小时后收集培养上清，用DMEM培养基梯度稀释50和100倍，分别使用PWL210及B品牌同类产品检测发光情况，结果以稀释50倍的PWL210检测亮度为100%计算。
结果：Gaussia萤光素酶稀释100倍时，PWL210依然有较高的发光亮度，且远远强于B品牌，信号半衰期大于5小时。
图4. Gaussia萤光素酶不同浓度稀释后检测对比图