高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(辉光型高亮版)

¥510.00¥2,600.00

英文名字:Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit(glow type,bright)
质量标准:Meiluncell
货号: PWL210

产品简介

高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(辉光型高亮版)提供一种高灵敏度及信号稳定的检测系统,具有更高灵敏度和发光信号稳定的特点,发光强度最高可达30万以上,半衰期最长可达5小时以上,符合高通量检测的需求。同时高斯荧光素酶(Gaussia Luciferase,185 AA,19.9 kDa)是一种分泌型萤光素酶,Gaussia Luciferase 质粒转染细胞后,大部分 Gaussia Luciferase 可以分泌到细胞外,所以本试剂盒既可以用于细胞培养上清样品的检测,也可以用于细胞裂解样品或纯化的酶的检测,特别适用于酶活性的实时研究。

Gaussia Luciferase 产生的生物发光信号原理是腔肠素(Coelenterazine)的氧化反应,该反应不需要ATP或其他辅助因子。

反应原理如下:

注意事项:

1.检测仪器选择:能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测,但是针对相同的样品,不同检测器本底信号值和测量值均可能不同;且对于同一样本检测,不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰,推荐使用不透明白色或黑色细胞培养板。

2.由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响,所以应确保同组内不同样本检测条件一致。

3.酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将检测工作液以及细胞培养板平衡至室温。

4.   如需同时检测多个细胞培养板,请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致,再进行数据读取,以此获得最佳的检测结果。

5.高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(辉光型高亮版)具有高发光信号及发光稳定性,发光强度最大可达30万以上。信号半衰期最长可达5小时以上。当酶表达量过低时,发光信号会降低,但信号稳定性会增强;当酶表达量过高时,信号半衰期会减少,但发光信号会增强。建议根据实际情况优化实验设计方案(如增加/减少质粒转染量),避免萤光素酶表达量过高/低。

6.Gaussia Glow-Bright Assay Substrate (100×) 配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发,有时会在初次使用时发现体积明显小于包装规格的情况,此时用无水乙醇把体积补足至包装规格,并混匀后即可使用。

保存条件

-20℃避光保存,自生产之日起12个月有效。

运输条件

干冰运输。

产品数据展示

  1. GaussiaGlow-Bright Assay 发光稳定性及线性检测

方法:将Gaussia萤光素酶载体瞬时转入HEK293T细胞,24小时后收集培养上清,分别使用PWL210及B品牌同类产品,正常使用量(样品20μL+工作液50μL)及减半使用量(样品20μL+工作液25μL)检测发光情况。

结果:PWL210的发光亮度与B品牌相近,且稳定性优于B品牌。PWL210减半使用发光亮度无明显变化。PWL210线性关系良好。

图1.  Gaussia萤光素酶发光强度及线性检测

  1. 多种细胞中Gaussia萤光素酶的检测情况

①细胞培养上清检测

方法:将Gaussia萤光素酶载体分别瞬时转入HEK293T、Vero、HCT116、CHO-K1细胞中,24小时后收集培养上清,分别使用PWL210及B品牌同类产品检测发光情况。

结果:同一种细胞内Gaussia萤光素酶检测,PWL210的发光亮度高于B品牌。Gaussia萤光素酶在HEK293T细胞中表达量最高。

图2.  多种细胞中上清Gaussia萤光素酶的检测情况对比图

左图:PWL210;右图:B品牌

②总高斯萤光素酶活性的快速检测

方法:使用不透光白板/黑板,将Gaussia萤光素酶载体分别瞬时转入HEK293T、Vero细胞中,24小时后分别向孔板内加入与培养基等体积的PWL210及B品牌同类产品工作液(培养基25μL+工作液25μL;培养基50μL+工作液50μL),室温孵育10min,检测发光情况。

结果:同一种细胞内Gaussia萤光素酶检测,工作液使用量相同时PWL210的发光亮度高于B品牌。在Vero细胞中,随着检测体系量增加,发光亮度有明显提高,效果明显优于B品牌。

图3.  多种细胞中Gaussia萤光素酶的检测情况对比图

左图:HEK293T细胞;右图:Vero细胞

  1. Gaussia萤光素酶稀释后检测

方法:将Gaussia萤光素酶载体分别瞬时转入HEK293T、Vero细胞中,24小时后收集培养上清,用DMEM培养基梯度稀释50和100倍,分别使用PWL210及B品牌同类产品检测发光情况,结果以稀释50倍的PWL210检测亮度为100%计算。

结果:Gaussia萤光素酶稀释100倍时,PWL210依然有较高的发光亮度,且远远强于B品牌,信号半衰期大于5小时。

图4.  Gaussia萤光素酶不同浓度稀释后检测对比图

规格

100T, 1000T

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