分子式：C67H105ClN2O5S 分子量：1086
简介：DiO plus是一种代替膜绿色荧光染料DiO的新型染料，DiO由于其溶解度低、易形成聚合物和横向扩散速度缓慢等缺点，很难用于神经元和细胞悬液的研究。DiO plus和DiO具有几乎相同的吸收光谱和发射光谱，但前者具有更好的膜溶解性，并且不形成非荧光性的聚集体，通常这也会减慢染料在膜上的扩散速率。DiO plus染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用0.1% TritonX-100透化）后，也可以很好地进行质膜染色。
别名：neuro-DIO
物理性状及指标：
外观：…………………橙黄色固体
溶解性：………………DMSO : 5 mM
纯度：…………………＞95%
λEx / λEm：………… 484/501 nm
储存条件：−20℃，避光防潮密闭干燥
运输条件：湿冰运输（按季节）
产品用途：科研试剂，广泛应用于分子生物学、细胞生物学、药理学等科研方面，严禁用于人体。DiO plus被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂 (long-termtracer)。DiO plus通常不会明显影响细胞的生存力 (viability)。DiO plus除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) 检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
使用方法：（来自公开文献，仅供参考）
1、染色液制备
（1）配制DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配制浓度1～5 mM。
注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。
2、悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37℃孵育细胞2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（3）孵育结束，1000～1500 rpm离心5 min。倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（4）重复步骤（3）两次以上。
3.、贴壁细胞的染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但表面要保持湿润。
（3）在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37 ℃孵育细胞2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
3、显微镜下观察绿色荧光。
产品应用实测：
本品配成5mM溶液后为橙黄色液体，溶液澄清度且颜色检测无可见异物；然后进行荧光染色检测：工作条件：荧光显微镜，Vero细胞，400×，工作浓度 5μM。
结果：经细胞膜荧光染色，在40倍物镜下可看到清晰绿色荧光。
【注意】
- 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
- 我司产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。
- 部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。
参考文献：
[1] 赵维彦.应用荧光剂Neuro-DiI(DiO)示踪周围神经再生及端侧吻合神经来源的实验研究[J].吉林大学, 2008.
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