CellTiter-Meiluncell 2.0发光法细胞活力检测试剂盒

产品简介

ATP生物发光技术的原理是荧光素酶以荧光素、三磷酸腺苷(ATP)和O₂为底物，在Mg²⁺存在时，能将化学能转化为光能。ATP既是荧光素酶催化发光的必需底物，又是所有生物生命活动的能量来源。在荧光素酶催化的发光反应中，ATP在一定的浓度范围内，其浓度与发光强度呈线性关系。

本试剂盒采用生物发光(bioluminescent)法，利用Firefly luciferase(萤火虫荧光素酶)催化底物——荧光素的转化，高效利用ATP的能量，发射出光子。发光信号与存在的ATP量呈正比，而ATP与存在于培养基中的细胞数目直接呈正比。

本试剂盒为多孔板而设计，是进行自动化高通量筛选(HTS)，细胞增殖和毒性分析的理想选择。均质检测步骤就是将单一试剂直接加入含有血清的培养细胞中，无需洗涤细胞、去除培养基或进行多步加样操作。

均质检测的”加样-混合-检测”的操作方案使得细胞裂解和产生的发光信号与存在的ATP量成正比，而ATP量直接与培养物中的细胞数量成正比。独特的均质检测方案避免了那些需要多个步骤的ATP检测方法可能会引入的误差。

CellTiter-Meiluncell 2.0发光法细胞活力检测试剂盒产品特点：

（1）简化了细胞活性检测步骤：均质的”加样-混合-检测”方案减少了其它同类检测所需的操作步骤。

（2）细胞用量更少：可准确地检测到低于常用的比色法和荧光法的检测低限的细胞数。减少了每个检测反应所需的细胞数。

（3）迅速获得结果：加入试剂后10分钟就能获得数据。

（4）可自行选择检测方案：可用于多种类型的多孔板操作。可用发光检测仪或CCD成像设备记录数据。

（5）可连续处理培养板：发光信号稳定，样品可进行批量处理。

本产品是PWL111的升级款，性能与进口同类产品更为接近。对于常规的实验室检测，优先推荐使用PWL214。

保存条件

-20℃避光保存，自生产之日起12个月有效。2-8℃避光保存，可稳定存放2天。

运输条件

干冰运输。

注意事项

1. 荧光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和检测试剂均需平衡至室温后再进行测定。本产品请勿室温存放。
2. 检测试剂请混匀后使用。
3. 本试剂盒的检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。为取得良好的使用效果，第一次解冻后可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有ATP污染。
4. 待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰荧光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。
5. 检测时须使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。
6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

数据展示

1. 不同种类细胞发光亮度比较

方法：将不同种类的细胞分别加入美仑及同类细胞活力检测试剂，震荡混匀2分钟后，室温孵育10分钟，使用Synergy HTX多功能酶标仪读数。

结果：我公司PWL214发光亮度略低于PWL111，略高于进口同类产品。

图1. 不同种类细胞发光检测比较图

2. 产品线性范围测试

方法：应用PWL214和其他同类产品对不同数量HCT116细胞进行活力检测。

结果：各产品发光信号与每孔细胞数均呈线性相关。（R²=0.999）

图2. 不同数量HCT116细胞活力检测图

3. 产品发光稳定性检测

方法：将NIH3T3细胞（5万/孔）应用PWL214和其他同类产品检测细胞活力并进行持续3小时的生物发光强度检测。

结果：PWL214对NIH3T3细胞（5万/孔）的化学发光稳定性与P品牌相近。

注：实际读数会因细胞种类、细胞数量、细胞培养时间、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

图3. NIH3T3细胞化学发光稳定性检测图

4. 药物IC50测试

方法：在96孔板中接种5000个Jurkat细胞，培养12h后，加药处理，使顺铂终浓度为0.05、0.1、0.5、1、2、5mM，24h后检测细胞IC50。

结果：PWL214的IC50与进口P品牌相近，PWL214与P公司产品具有一致的基本性能，可以实现无缝切换。

图4. Jurkat细胞IC50检测图

表1  Jurkat细胞IC50检测结果

5. 孔间平行性检测

方法：在不透光96孔板中分别接种20000个HL60细胞（100μL）及5μM ATP溶液，每孔分别加入100μL我公司及P品牌细胞活力检测试剂，每种试剂做8个平行孔，计算变异系数CV值。

结果：PWL214产品CV值低于P品牌，检测平行性更好。

表2  孔间平行性检测