藻红蛋白(PE)

藻红蛋白(PE)；R-Phycoerythrin;(R-PE)

Ex (nm) 565
Em (nm)575
溶解性：溶于水

简介：R-藻红蛋白（R-PE）是从红藻中分离出来的。它的主要光吸收峰在565nm，第二吸收峰在496和545nm处。它的第二类高峰中相对突起的吸收峰，在来自不同种类的R-PEs中有显著性的变化。R-PE由三个亚基组成，α，20,000 道尔顿_ (~20,000 daltons),β，20,000 道尔顿_ (~20,000 daltons) andγ，30,000 道尔顿_ (~30,000 daltons).研究发现完整的R-PE分子量大约在17-24万道尔顿，经过检测一个亚基由（α-β）6γ组成。
储存条件：2-8℃

常见使用方案举例（来自公开文献，仅供参考）
一：藻红蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体
1. 将保存在硫酸胺中的PE（5mg,约1.8ml）。充分摇匀后，取0.9ML，12000r/min 离心10min,弃上清。将沉淀重悬于0.5mlPBS中。在300MLPBS中室温透析30Min。期间换液俩次。
2. 调整PE浓度为1.4mg/ml,加入40ulSPDP (MB0059)，浓度1.3mg/ml in 甲醇.室温孵育。2.5h
3. 取纯化CD4抗体200ul（25mg/ml）加入40ulSMCC(MB0442)(1.7mg/ml in DMSO);室温孵育1h
4. 将75ul DTT加到SPDP-PE中，室温孵育30Min
5. 用PD-10柱纯化SPDP-PE-DTT和SMCC-CD4单抗，并将其混合，4摄氏度搅拌过夜。
6. 在过夜的标记混合物种加入NEM(MB2727) 160ul (12.5mg/ml,PBS溶解)终止反应。4摄氏度继续搅拌30Min
7. 将标记抗体通过S-300柱在AKTA检测下分离纯化，PBS洗脱，收集第一峰。
8. 收集的标记抗体加入终浓度1%BSA，0.1% 防腐剂，1mmol/L碘乙酰胺，0.1mmol/L EDTA，4度保存
二：藻红蛋白标记抗体的方法：
1.巯基化藻红蛋白（PE）的制备；
（1）将600μl浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2ml浓度为3.6mg/ml的PE中；
（2）将以上混合液和1.2ml pH6.8的PB混合，而后装入透析袋置入50mmol/L pH6.8的PB中于4℃透析，过夜；
（3）再换用pH7.5 PB透析6h。每个PE分子中可结合8个巯基；
2.巯基PE-IgG的制备；
（1）将30μl浓度为1.1mg/ml的异双功能试剂SPDP的乙醇溶液，加入到700μl的4.2mg/ml IgG PB溶液（50 mmol/L pH7.5），在室温中反应2.5h；
（2）再将400μl浓度为1.7mg/ml的巯基化PE加到500μl反应混合液中，室温反应12h；
（3）加入50 mmol/L的碘乙酸钠100μl来封闭残余巯基，于4℃下用PB透析过夜；
（4）最后加入0.01%的Na3 N3 后分装，于4℃保存半年；
三：PE-标记蛋白A方法：
1.称取4.08mg PE溶于1ml浓度为0.1mmol/ml pH7.4的PBS中，溶解后，取出0.5ml，再加入浓度为2.65mg/ml的SPDP无水甲醇液10μl，SPDP/蛋白质物质的量比为10，22℃反应5min，过Sephadex G-50（1×17cm），用100mmol/L pH7.4的PBS平衡和洗脱；
2.将0.5ml浓度为2mg/ml的蛋白质和100mmol/L pH7.4的PBS液混合，把2.6μl上述SPDP甲醇液加入混合液中，使得SPDP：蛋白质=9：5，于22℃下放置40min后，再加如25μl pH7.4的二硫苏糖醇（DTT）缓冲液，于22℃下反应25min后，过Sephadex G-50，收集蛋白A峰；
3.将0.77mg/ml的PE和0.27mg/ml蛋白A等量混合，于22℃下反应6h后，将混合物于4℃保存备用；
4.将以上两种PE标记制品溶于0.01mol/L pH7.4 PB（含有0.1mol/L DETA、1mol/L 碘乙酰胺、1%BSA和0.1% NaN3 ）中，于0—4℃保存；

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