产品描述
本试剂盒应用于免疫印迹实验,以化学发光法检测蛋白质。其原理是以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体直接或间接结合膜上的目的蛋白质,在洗膜后加入本试剂盒配制的ECL工作液,即可由HRP催化发出荧光。
本产品对抗原的最低检测限可达到中飞克级,在western blot实验中,一抗(1 mg/mL)储存液可稀释1:1,000至1:50,000倍,二抗(1mg/mL)储存液可稀释1:50,000至1:200,000倍。发光信号持久,结果可以通过X光胶片曝光或者其他适当荧光成像设备进行检测。
产品优势
- 灵敏度高,可检测中飞克级抗原。
- 信噪比高,条带清晰。
- 抗猝灭能力强,可重复曝光。
- 节省抗体,降低成本。
操作指南
- 进行常规Western Blot实验;可参考本站技术分享;
- 按照1:1的比例等体积混合适量A液和B液制备ECL工作液。注:ECL工作液最好在临近使用前配制,推荐使用剂量:0.1ml工作液/cm2膜。
- 用镊子取出洗好的膜,沥干膜上洗膜液,将结合有蛋白的一面朝上,放置于洁净保鲜膜上。
- 加上配好的ECL工作液,孵育时确保工作液覆盖整张膜,室温孵育1-2min。
- 弃去印迹膜上ECL工作液,将一张洁净的保鲜膜平整的铺在印迹膜上。
- 将处理好的印迹膜置于X光片盒中,在暗室中取一张胶片小心置于膜上,曝光时间取决于膜上的发光强度,曝光后立即显影定影,或将印迹膜放置到荧光成像仪内,按仪器说明书进行检测。
实验数据
(上样蛋白量倍比稀释,目的蛋白Histone H3)
图1. 我司ECL发光试剂与其他品牌同级别产品检测灵敏度的比较
图2. 我司ECL发光试剂信号持续时间的研究
注意事项
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- 本ECL试剂盒灵敏度高,需要优化好上样量、一抗、二抗浓度和稀释液、印迹膜及封闭试剂,并按照蛋白表达丰度,参考推荐的抗体稀释比例,来获得最佳实验结果。
- 如果印迹膜上条带过亮时,建议使用我公司生产的膜再生液(MA0181)去除抗体后重新封闭孵育,并提高一抗二抗稀释比例。如果条带过暗也可将二抗稀释比例降低至1:5000至10,000倍,以达到最佳效果。
- 本试剂盒A液和B液不可以相互污染,否则会降低产品的使用效果。
- 发光强度会随时间缓慢减弱,建议在两小时内完成实验。
- 孵育二抗后,洗膜缓冲液应避免使用NaN3,这是HPR的抑制剂。
- 为了您的安全和健康,请穿戴实验服并戴一次性手套操作。
保存条件
2-8℃避光保存,1年有效。