AZD2858

AZD2858一种选择性的GSK-3抑制剂，IC50为68 nM，激活Wnt信号通路，增强大鼠的骨质。

靶点

GSK-3 68 nM

体外研究

AZD2858是选择性的GSK-3抑制剂，IC50 是68 nM，抑制tau 396位点的磷酸化，激活Wnt信号通路。AZD2858 处理(1 μM, 12 h)分离的人成骨细胞导致β-catenin水平增加3倍。在人和大鼠的间充质干细胞中，AZD2858引起β-catenin稳定，激活体外成骨细胞和成骨细胞钙化的hADSC定型。

体内研究

与对照组相比，大鼠口服AZD2858治疗两周后引起骨密度剂量依赖增加，治疗两周后，在每天20 毫克/千克(总BMC: 对照组的172%)剂量下具有最大疗效。在皮层中也会发现小而显著的效果(总BMC: 对照组的111%)。AZD2858处理大鼠(30 微摩尔/千克)三周后出现胼胝中矿物质密度(2周时28% ，三周时38%)和矿物质含量(两周时81% ，三周时93%)增加。AZD2858处理使骨折恢复更快，有骨性骨痂但没有明显的软骨成分。大鼠用AZD2858处理28天后，使血清中骨更新标志物和骨密度增加产生时间依赖性变化。大鼠用AZD2858处理7天后，骨形成标志P1NP增加，溶蚀标志物TRAcP-5b降低，这表明骨合成代谢增加，溶蚀作用减弱。

SB216763

MB4500

TDZD-8

MB3706

Tideglusib

MB3653

TWS119

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2050 mL

11.0249 mL

22.0497 mL

5 mM

0.4410 mL

2.2050 mL

4.4099 mL

10 mM

0.2205 mL

1.1025 mL

2.2050 mL

50 mM

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Tau磷酸化试验:
表达4-复制Tau的NIH-3T3 细胞用作测定AZD2858活性的细胞系。细胞在含有2 mM L-glut和10% HiFCS的DMEM培养基上培养。以6×105细胞/孔的密度接种在6孔板上。每次实验中，AZD2858的浓度分别是1, 10, 100, 500, 1000, 2000以及10,000 nM，重复三次。细胞预处理4小时，用100ul裂解液(0.5% NP-40, 10 mM Tris, pH 7.2, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA)裂解。加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂（50 mM NaF, 0.2 mM NaVO4 和Cocktail 蛋白酶抑制剂）制成悬浮液，在− 80°C冷冻至少1小时，在解冻并离心裂解前，根据标准的操作手册做免疫印迹分析。封闭以后，印迹暴露于第一抗体，Phospho-Ser396-tau (1:1000)过夜，漂洗，然后用第二抗体(驴抗兔，1:5000)培养，随后清洗。对于重新检测，使用第一抗体Tau5 (1:200)和第二抗体辣根过氧化物酶连接的抗体（羊抗鼠，1:10000）。所有印迹通过ECL蛋白质印迹检测试剂盒，Kodak X-ray胶片生成，用密度分析定量，计算S396tau和总tau（tau5）的比值。

细胞实验

• Cell lines:人类脂肪衍生的干细胞和大鼠MSCs
• Concentrations:~20 mM
• Incubation Time:24小时
• Method:人脂肪衍生的干细胞和大鼠MSCs（分离自怀孕8周以上的Sprague Dawley大鼠骨髓）在含有5% FBS和2 mM GlutaMax的DMEM培养基中生长。细胞以3–5000个细胞/孔的密度接种在含基础培养基的96孔板上，培养18小时后用AZD2858 (0.3 nM 到 20 mM)处理。

动物实验

• Animal Models:大鼠
• Formulation:水中调节PH到3.5
• Dosages:30微摩尔/千克/天
• Administration:口服