PCI-24781 (Abexinostat)

Abexinostat (PCI-24781)是一种新型的pan-HDAC抑制剂，靶向作用于HDAC1，Ki为7 nM，对HDACs 2， 3， 6，和10有适中的抑制性，但比作用于HDAC8选择性强40倍。

靶点

体外研究

PCI-24781针对于多种肿瘤细胞系具有有效的抗肿瘤活性，GI50分布于0.15 μM 到3.09 μM之间。PCI-24781也抑制HUVEC 内皮细胞的增值，GI50为0.43 μM。PCI-24781处理导致HCT116 和 DLD-1细胞系中组蛋白乙酰化和微管蛋白乙酰化的剂量依赖性积累，同时诱导p21表达，PARP的剪切以及γH2AX的累积。PCI-24781抑制HDACs酶活导致HR 相关基因的转录水平出现明显下降，其中包括RAD51。与抑制HR 一致，在CHO细胞中，PCI-24781处理后导致I-SceI诱导染色质断裂引起的同源定向修复能力下降。PCI-24781诱发S 期缺失，G2期细胞周期停滞以及软组织（STS）细胞的凋亡。PCI-24781诱导STS细胞中Rad51 的转录抑制很有可能是通过增强E2F1在Rad51近端启动子区域的结合。PCI-24781也诱导Hodgkin淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤中蛋白酶和活性氧依赖的NF-κB信号通路介导的细胞凋亡过程。

体内研究

PCI-24781按200 mg/kg 剂量作用于移植小鼠，隔一天一次,明显抑制HCT116 和 DLD-1肿瘤细胞生长，抑制效果分别是69%和59%。PCI-24781按20 mg/kg, 40 mg/kg, 80 mg/kg和160 mg/kg剂量每星期连续四天给药处理，然后三天不给药处理((一天一次，每周四天))作用于HCT116移植小鼠模型，抑制效果分别是48%, 57%, 82.2%, 和80.0%

JNJ-26481585

MB3741

MC1568

MB3550

LMK235

MB6006

Pracinostat (SB939)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.5162 mL

12.5811 mL

25.1623 mL

5 mM

0.5032 mL

2.5162 mL

5.0325 mL

10 mM

0.2516 mL

1.2581 mL

2.5162 mL

50 mM

0.0503 mL

0.2516 mL

0.5032 mL

HDAC 酶活鉴定:
运用连续胰蛋白酶耦合分析法检测HDAC酶活。将100μL反应体系置于96孔板中分析抑制剂表征。将HDAC 酶添加到50 mM HEPES, 100 mM KCl, 0.001% Tween 20, 5% DMSO (pH 7.4) 以及补充了牛血清蛋白 (BSA)的反应体系中，与不同浓度的PCI-24781混合均匀，孵育15分钟。每种HDAC同工酶使用的BSA浓度不一样，分别是0% (HDAC1)，0.01% (HDAC2, 3, 8, 10)和0.05% (HDAC6)。胰蛋白酶的终浓度是50 nM，acetyl-Gly-Ala-(N-acetyl-Lys)-AMC的终浓度是25μM(HDAC1,HDAC3,HDAC6),50μM (HDAC2,HDAC10)和100 μM (HDAC8)，起始反应。设置八个复孔的阴性对照中不加入PCI-24781。使用酶标仪检测反应。经过30分钟的延迟时间，通过355纳米的激发波和460纳米吸收波得到荧光值。检测反应速率是测定增强荧光所需的反应时间。使用程序BatchKi可以得到抑制常数Ki(app)

细胞实验

• Cell lines:HCT116, HCT-15, BT-549, NCI-H226, CWR-22RV1, MCF-7, NCI-PC3, DLD-1, SKOV-3和 OVCAR-3细胞
• Concentrations:0–10 μM，溶于 DMSO
• Incubation Time:48, 72, 96和120 小时
• Method:运用一种微量蓝色荧光的细胞增殖试验检测PCI-24781处理后细胞增殖，细胞至少培养两倍增。细胞接种于96孔板，PCI-24781设置9个从0.0015 μM 到10 μM半对数不等间隔的浓度梯度，每一梯度设计三个复孔。DMSO终浓度每孔0.15%。设定抑制细胞增殖GI50在达到50% 到 95%之间为置信区间，运用四参数方程，利用非线性回归曲线计算PCI-24781的有效浓度。
  (Only for Reference)

动物实验

• Animal Models:携带HCT116 和DLD-1移植瘤细胞的BALB/c nu/nu 雌小鼠
• Formulation:配制于30% HP-cyclodextrin 水溶液中
• Dosages:~200 mg/kg
• Administration:每隔一天一次或者每星期连续四天，停滞三天。