SKI II

SKI II是高度选择性的，非ATP竞争性S1P receptor抑制剂，IC50为0.5 μM,对其他激酶，包括PI3K, PKCα和ERK2没有抑制作用。

靶点

S1P

IC50

0.5 μM

体外研究

SKI II作用于乳腺癌细胞系MDA-MB-231，有效抑制内源性SK活性。SKI II作用于人类癌细胞系，包括T-24, MCF-7, MCF-7/VP, NCI/ADR，具有显著的抗增殖效果，IC50分别为4.6 μM, 1.2 μM, 0.9 μM 和 1.3 μM。SKI II也诱导T24细胞凋亡，与降低S1P水平相一致。SKI II作用于JC细胞，降低S1P形成，IC50为12 μM，这种作用具有浓度依赖性。此外，SKI II通过下调P-gp的表达，及通过下调SPHK1而上调凋亡，可逆转SGC7901/DDP对Cisplatin的耐药性。

体内研究

SKI II按50 mg/kg剂量腹腔给药或口服给药携带JC乳腺癌细胞的同源Balb/c小鼠实体瘤模型，显著降低肿瘤生长，与对照组相比，无明显的毒性或体重减轻。SKI II按50 mg/kg剂量腹腔注射给药小鼠，通过抑制内源性S1P生成，可改善抗原诱导的支气管平滑肌高反应性。

PF-543

MB3825

BAF312 (Siponimod)

MB3756

Ponesimod(ACT-128800)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.3027 mL

16.5136 mL

33.0273 mL

5 mM

0.6605 mL

3.3027 mL

6.6055 mL

10 mM

0.3303 mL

1.6514 mL

3.3027 mL

50 mM

0.0661 mL

0.3303 mL

0.6605 mL

SK实验:
进行适用于筛选重组人SK抑制剂的中等通量检测。5 μg 纯化的 GST-SK 融合蛋白与12 nM 鞘氨醇[含100倍稀释的[3-3H]鞘氨醇(20 Ci/mmol)], 1 mM ATP, 1 mM MgCl2, 和 200 μL 实验缓冲液[20 mM Tris HCl(pH 7.4), 20%甘油, 1 mM β-巯基乙醇, 1 mM EDTA, 20 mM ZnCl2, 1 mM 原钒酸钠, 15 mM NaF, 及0.5 mM 4-deoxypyridoxine] 结合。实验在25°C下震荡运行30分钟，包含1％DMSO或5 g/mL实验化合物，相当于浓度为10-25 μM。加入50 μL浓(NH4)(OH)终止该反应，然后使用氯仿：甲醇（2:1）提取实验混合物。水相转移到闪烁瓶中，使用Beckman LS 3801闪烁计数器对放射性进行量化，用于测量[3H]]S1P形成。定量检测的批间和批内的变异系数分别为10%和20%。

细胞实验：

• Cell lines:T-24, MCF-7, MCF-7/VP, NCI/ADR细胞系
• Concentrations:~50 μM
• Incubation Time:48小时
• Method:T24, MCF-7, MCF-7/VP, 和NCI/ADR 细胞接种在96孔组织培养板上,达到15％汇合。24小时后，使用各种浓度的抑制剂处理细胞。48小时后，使用Sulforhodamine B法测定细胞存活率

动物实验：

• Animal Models:携带JC移植瘤的小鼠
• Formulation:DMSO(腹腔注射), 聚乙二醇400(口服)
• Dosages:~100 mg/kg
• Administration:腹腔给药或口服给药