CX-5461

CX-5461是一种rRNA synthesis抑制剂，选择性抑制Pol I驱动的rRNA转录，在HCT-116，A375，和 MIA PaCa-2细胞中IC50为142 nM，对Pol II没有作用，对rRNA转录的抑制比对DNA复制和蛋白翻译的抑制选择性高250到300倍。

靶点

体外研究

CX-5461能够选择性抑制HCT-116细胞中rRNA合成(Pol I IC50=142 nM；Pol II IC50 > 25 μM；选择性约200倍)。CX-5461对rRNA合成的选择性抑制在两种其他人类实体肿瘤细胞系，黑色素瘤 A375 (Pol I IC50 = 113 nM；Pol II IC50 > 25 μM)和胰腺癌MIA PaCa-2 (Pol I IC50=54 nM；Pol II IC50 ~25 mM)中得到证实。CX-5461对rRNA转录抑制作用的选择性是对DNA复制和蛋白质翻译的250~300倍。CX-5461对一组人类癌细胞系表现出光谱抗增殖活性，但是对非转化的人类细胞的作用活性很小。所有测试细胞系的中值EC50为147 nM，所有正常细胞系的EC50值大约为5, 000 nM。对HCT-116，A375，和MIA PaCa-2细胞系的抗增殖剂量响应评估的得到的EC50值分别为167，58，和74 nM。CX-5461通过p53-不依赖过程，诱导固体肿瘤细胞自吞噬或衰老，但不诱导细胞凋亡。

体内研究

异种移植人固体肿瘤的小鼠模型中，CX-5461口服生物可利用，且在体内具有抗肿瘤活性。CX-5461显示出显著的MIA PaCa-2 TGI，在第31天，TGI 为69%，与gemcitabine (63% TGI)相当。Gemcitabine是一种阳性对照，其每3天以120 mg/kg腹腔内给药。同样的，CX-5461表现出显著的A375 TGI，第32天的TGI为79%。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9470 mL

9.7350 mL

19.4700 mL

5 mM

0.3894 mL

1.9470 mL

3.8940 mL

10 mM

–

–

–

50 mM

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Pol I和 Pol II 转录活性检测:
两个寿命短暂的RNA转录物(半衰期~20-30 分钟)，一个由聚合酶I产生，另一个由聚合酶II产生，通过qRT-PCR定量，作为CX-546对转录的相关作用的测量。45S前体rRNA作为聚合酶I转录物，原癌基因c-myc作为聚合酶II转录物的对比。聚合酶I和聚合酶II转录物均会被通常的细胞应激影响。为最小化应激作用的潜在影响，将细胞在测试试剂下仅暴露很短的时间(2 小时)。如果CX-5461影响它们的合成，暴露的时间足以使这些转录物减少90%以上。

细胞实验：

Cell lines:一组癌细胞和正常细胞系

• Concentrations:0-2 μM
• Incubation Time:96小时
• Method:将细胞接种在96孔板，第二天用剂量响应的CX-5461处理96小时。细胞活性使用Alamar Blue 和CyQUANT试验测定。

动物实验：

• Animal Models:5×106MIA Paca-2 和 A375 癌细胞皮下注射到5-6周大雌性无胸腺小鼠的右侧面
• Formulation:CX-5461溶解于50 mM NaH2PO4(pH 4.5)
• Dosages:50 mg/kg
• Administration:CX-5461通过口服给药，每天一次或每3天一次。