GDC-0980 (RG7422)

Apitolisib (GDC-0980, RG7422)是一种有效的，I型PI3K抑制剂，作用于PI3Kα/β/δ/γ，无细胞试验中IC50分别为5 nM/27 nM/7 nM/14 nM，也是mTOR抑制剂，无细胞试验中Ki为17 nM，比作用于其他PIKK家族激酶选择性高。Phase 2。

靶点

PI3Kα

PI3Kβ

PI3Kδ

PI3Kγ

mTOR

IC50

5 nM

27 nM

7 nM

14 nM

17 nM (Ki)

体外研究

GDC-0980对I类PI3K和mTOR激酶比对其他大多数激酶表现出有效的选择性抑制作用，对mTOR的Ki为17 nM，对PI3Kα，β，δ，和γ的IC50 分别为5 nM，27 nM，7 nM，和14 nM。在体外，GDC-0980显著抑制PC3和MCF7细胞的细胞增殖，IC50分别为307 nM和255 nM。一项最近的研究表明，GDC-0980通过抑制细胞周期进程，并诱导细胞凋亡降低癌细胞活性，在前列腺癌(IC50 < 200 nM 50%，<500 nM 100%)，乳腺癌(IC50 <200 nM 37%，<500 nM 78%) 和NSCLC(IC50 <200 nM 29%，<500 nM 88%)中具有最大效能，在胰腺癌(IC50 <200 nM 13%，<500 nM 67%) 和黑色素瘤细胞系(IC50 <200 nM 0%，<500 nM 33%)中效能较低。

体内研究

在PC-3和MCF-7 neo/HER2异种移植模型中，GDC-0980在1 mg/kg剂量下，通过引起肿瘤生长延迟，表现出显著的抗肿瘤活性。此外，GDC-0980导致肿瘤郁积或退化，最大耐受剂量为7.5 mg/kg。在小鼠体内，1 mg/kg GDC-0980静脉内给药导致低清除率(Clp: 9.2 mL/min/kg，Vss: 1.7 L/kg)。同时，以5 mg/kg的80% PEG400溶液，或50 mg/kg在0.5%甲基纤维素/0.2% Tween-80中以晶体悬浮液口服给药，具有良好的药代动力学参数。

特征

一种有效的，选择性的，口服生物可利用的 PI3Kα，β，δ，γ 和 mTORA 抑制剂。

PI-103

MB3867

PIK-75

MB3869

GSK2126458 (GSK458)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0056 mL

10.0281 mL

20.0562 mL

5 mM

0.4011 mL

2.0056 mL

4.0112 mL

10 mM

0.2006 mL

1.0028 mL

2.0056 mL

50 mM

–

–

–

酶活性:
I类PI3K亚型的酶活性使用荧光偏振试验测量，其监测产物3,4,5-三磷酸肌醇分子的形成，该产物与荧光标记的PIP3竞争性结合到GRP-1普列克底物蛋白同源域。磷脂酰肌醇酯-3-磷酸产物的增加，使标记的荧光从GRP-1蛋白结合位点被取代，从而导致荧光偏振信号减少。I类PI3K亚型以异二聚体重组蛋白表达并纯化。PI3K亚型在初速率条件下，在10 mM Tris (pH 7.5)，25 μM ATP，9.75 μM PIP2，5% 甘油，4 mM MgCl2，50 mM NaCl，0.05% (v/v) Chaps，1 mM 二硫苏糖醇，2% (v/v) DMSO存在下测定，各种亚型的浓度为: PI3Kα,β 为60 ng/mL；PI3Kγ为8 ng/mL；PI3Kδ 为45 ng/mL。测定在25°C下进行30分钟后，以终浓度为9 mM EDTA，4.5 nM TAMRA-PIP3，和4.2 μg/mL GRP-1检测蛋白质终止反应，然后在Envision酶标仪上读取荧光偏振数据。IC50s通过将剂量反应曲线拟合到4参数方程计算。人重组mTOR(1360−2549)在昆虫细胞中表达并纯化，使用Lanthascreen荧光能量共振转移法测定，其中重组绿色荧光蛋白(GFP)-4-EBP1的磷酸化使用铽标记的抗4-EBP1的磷酸-苏氨酸37/46抗体检测。反应通过ATP起始，在50 mM Hepes (pH 7.5)，0.25 nM mTOR，400 nM GFP-4E-BP1，8 μM ATP，0.01% (v/v) Tween 20，10 mM MnCl2，1 mM EGTA，1 mM 二硫苏糖醇，和1% (v/v) DMSO存在下进行。试验在初始速率于室温下进行30分钟，然后终止反应，在2 nM Tb-抗-p4E-BP1抗体和10 mM EDTA存在下检测产品。将剂量反应曲线拟合到竞争性紧密结合抑制的方程，表观Ki使用测定的6.1 μM ATP的 Km进行计算。

细胞实验：

• Cell lines:PC3 和 MCF7.1
• Concentrations:0 到 10 μM
• Incubation Time:72小时或 96小时
• Method:抗增殖细胞试验使用PC3和MCF7.1人肿瘤细胞系进行。MCF7.1是体内挑选的细胞系，最初衍生自亲本人MCF7乳腺癌细胞系。细胞系在RPMI中于3°C，5% CO2中培养，并用10%胎牛血清，100 units/mL 青霉素，和100 μg/mL 链霉素，10 mM HEPES，和2 mM 谷氨酸盐增补。MCF7.1细胞或PC3细胞分别以1000细胞/孔或3000细胞/孔接种在384孔板的培养基中，培养过夜，再加入GDC-0980，使终DMSO浓度为0.5% v/v。MCF7.1细胞和PC3细胞分别培养3天和4天，然后加入CellTiter-Glo试剂，并使用Analyst酶标仪读取荧光。对于抗增殖试验，细胞生长抑制剂，比如aphidicolin，和细胞毒素剂，比如staurosporine，作为对照。剂量反应曲线拟合为4参数方程，相对的IC50s使用Assay Explorer软件计算。

动物实验：

• Animal Models:PC3 和 MCF7.1 细胞皮下注射到无胸腺 nu/nu(裸)小鼠的右右前肢
• Formulation:GDC-0980在0.5%甲基纤维素与0.2% Tween-80 (MCT)中溶解。
• Dosages:≤7.5 mg/kg
• Administration:口服给药