DMXAA (Vadimezan)

DMXAA (ASA404)是vascular disrupting agents (VDA)（血管阻断剂），是DT-diaphorase的竞争性抑制剂，Ki为20 μM，IC50为62.5 μM。

靶点

DT-diaphorase(Cell-free assay)

DT-diaphorase(Cell-free assay)

IC50

20 μM(Ki)

20 μM(Ki)

体外研究

在体外, DMXAA（ASA404)抑制纯化的DT-心肌黄酶，IC50为62.5 μM，Ki为20 μM。DMXAA（ASA404)作用于DLD-1人结肠癌细胞,抑制DT-心肌黄酶活性，IC50为49.6 μM，而对细胞色素b5还原酶和细胞色素P450还原酶没有显著作用效果。DMXAA（ASA404)为抗病毒药物，作用于RAW 264.7巨噬细胞，抑制VSV-诱导的细胞毒性，也抑制流感病毒复制。最新研究显示DMXAA（ASA404)作用于VEGFR几种激酶成员,如人人脐静脉内皮细胞中的VEGFR2信号，具有非免疫调节的抑制效果。

体内研究

DMXAA（ASA404)显著延迟化学致癌物诱导的细胞生长,提高肿瘤倍增时间，且提高从治疗到安乐死的时间。DMXAA（ASA404)处理携带肿瘤的动物后,平均肿瘤倍增时间,平均肿瘤变三倍时间，及从治疗到安乐死的平均时间分别提高4.4-, 1.8- 2.7-倍。DMXAA（ASA404)处理显著保护感染200 p.f.u.小鼠适应的H1N1流感PR8病毒的C57BL/6J小鼠，使存活率达60%,而对照组存活率只为20%。

特征

DMXAA（ASA404)是DT-心肌黄酶竞争性抑制剂。

Plinabulin (NPI-2358)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.5425 mL

17.7123 mL

35.4246 mL

5 mM

0.7085 mL

3.5425 mL

7.0849 mL

10 mM

0.3542 mL

1.7712 mL

3.5425 mL

50 mM

–

–

–

DT-心肌黄酶活性和酶抑制动力学分析:
通过在Beckman DU 650分光光度计上检测细胞色素 c 在 550 nm处减少量而测定纯化的DT-心肌黄酶活性。每组实验含细胞色素c(70 μM), NADH(多种浓度), 纯化的DT-心肌黄酶(0.032 μg),及溶于含0.14% BSA终体积为1 mL Tris–HCl buffer(50 mM, pH 7.4)的维生素K(多种浓度)。加入NADH开始反应。根据反应曲线初始部分(30秒)计算减少率, 结果表示为μmol 减少的细胞色素/min/mg 蛋白，使用21 mM−1cm−1摩尔消光系数表示减少的细胞色素c。在室温下进行酶反应，所有反应做三次平行。反应中含有的DMXAA（ASA404) (不同浓度) 用来表示纯化的 DT-心肌黄酶抑制活性,通过改变NADH (维生素K不变)维生素K (NADH不变) 的浓度测定抑制特性。获得Ki值。通过测量对Dicumarol敏感的DCPIP在 600 nm处的减少量而测定DT-心肌黄酶作用于DLD-1细胞的活性收集处于指数生长中期的DLD-1细胞，置于冰冻buffer (Tris–HCl, 25 mM, pH 7.4和 250 mM蔗糖)，然后在冰上进行超声处理。酶反应条件为2 mM NADH, 40 μM DCPIP, 溶于含BSA (0.7 mg/mL)终体积为1 mL Tris–HCl (25 mM, pH 7.4) 的 20 μL Dicumarol。使用21 mM−1cm−1的摩尔消光系数表示对Dicumarol敏感的 DCPIP减少量。通过 Bradford检测测定蛋白水平。

细胞实验

• Cell lines:DLD-1和 H460
• Concentrations:0 到2 mM
• Incubation Time:96 小时
• Method:DLD-1人结肠癌和H460人非小细胞肺癌细胞单层培养在RPMI 1640培养基中，培养基中补充胎牛血清 (10%), 丙酮酸钠(2 mM), 青霉素/链霉亲和素 (50 IU mL−1/50 μg mL-1) 及l-谷氨酰胺(2 mM)。在有氧条件下进行MTT 实验和所有其他实验，检测药物敏感性。细胞接种在96孔板上，然后在含5% CO2的环境下温育过夜。完全移除培养基，使用含多种药物浓度的培养基替代。在只有维生素K时，药物处理时间为1小时,然后细胞在Hanks’平衡盐溶液中冲洗两次，然后在每孔中加入200 μL 新鲜RPMI 1640培养基。 在只有DMXAA（ASA404) 存在时，药物处理时间为3小时。 随后温育4天，使用MTT检测测定细胞存活情况。为了DMXAA（ASA404)和维生素K联用，初步建立细胞 ，选择非毒性(细胞存活率>95%)浓度的DMXAA（ASA404)。细胞使用DMXAA（ASA404) (2 mM)先处理2小时，随后移除培养基，使用含抑制剂 (DMXAA（ASA404)，持续浓度为2 mM)和维生素K(多种浓度)的培养基更换。再温育7小时，使用Hanks’平衡盐溶液冲洗细胞，再加入生长培养基。

动物实验

• Animal Models:注射化学致癌物 (NMU)的雌性 Wistar大鼠
• Formulation:DMXAA（ASA404) 溶于5% NaHCO3
• Dosages:≤300 mg/kg
• Administration:腹腔注射