CP-673451

CP-673451是一种选择性的PDGFRα/β抑制剂，无细胞试验中IC50为10 nM/1 nM，比作用于其他血管生成受体选择性高450倍以上，具有抗血管生成和抗肿瘤活性。

靶点

体外研究

CP-673451是一种选择性的PDGFRα/β抑制剂，IC50值为10 nM/1 nM，比作用于其他血管生成受体选择性高450倍以上。在恶性胶质肿瘤中，CP-673451 (33 毫克/千克)能够抑制>50%的PDGFR-β受体4小时，在血浆中Cmax下相应的EC50为120纳克/毫升。在海绵的血管生成模型中，CP-673451在3毫克/千克 (q.d. ×5, p.o.，在 Cmax下相应为5.5纳克/毫升)剂量下，抑制70%PDGF-BB刺激的血管生成。CP-673451通过降低GSK-3α和GSK-3β的磷酸化作用减少细胞增殖。在RD和RUCH2培养基中，CP-673451妨碍rhabdosphere形成能力和细胞的分化，导致衰老增加。

体内研究

CP 673451 (每天一次口服定量给药)在无胸腺小鼠体内抑制许多人类移植肿瘤，包括H460人类肺癌，Colo205和 LS174T 人类结肠癌，以及U87MG人类胶质母细胞瘤，在其皮下的生长(ED50 < 33毫克/千克)。再在RUCH2异种移植的小鼠体内，CP 673451减少了肿瘤的生长和间质细胞的浸润。

Telatinib

MB3947

CP-673451

MB5074

利尼伐尼；ABT869

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3952 mL

11.9760 mL

23.9521 mL

5 mM

0.4790 mL

2.3952 mL

4.7904 mL

10 mM

0.2395 mL

1.1976 mL

2.3952 mL

50 mM

0.0479 mL

0.2395 mL

0.4790 mL

激酶抑制试验:
一个谷胱甘肽S-转移酶标记的激酶域，PDGFR-β (氨基酸693-1401，登记号. J03278)的细胞内部分在Sf-9(杆状病毒表达系统)细胞中表达。在逐渐增加ATP浓度的磷酸化缓冲液[50 mmol/L HEPES (pH 7.3)，125 mmol/L NaCl，24 mmol/L MgCl2，在预先涂有100 μL 100 μg/mL poly-Glu-Tyr (4:1 ratio) 的Nunc Immuno MaxiSorp 96孔板上，于PBS中稀释] 中培养酶进行酶动力学测定。在10分钟后，将板进行清洗（PBS，0.1%吐温20），加入抗-磷酸酪氨酸-辣根过氧化酶抗体，在PBS中稀释，0.05%吐温20，3%BSA，在室温下培养30分钟。将板按如上进行清洗，并加入3,3′,5,5′-四甲基联苯胺进行培养。加入等体积的0.09 NaH2SO4停止反应。随后磷酸酪氨酸依赖性的信号在450nm下于平板阅读器上定量测定。对于常规酶测定，酶在10 μM (终含量) ATP以及化合物存在下于DMSO (1.6% v/v DMSO assay final)中稀释，在室温下于板中培养30分钟，如上，板预先涂有100 μL 的6.25 μg/mL poly-Glu-Tyr。测定的其余部分如上所述，IC 50值的计算为对照组的抑制百分比。

细胞实验

• Cell lines:PAE
• Concentrations:~3000 nM
• Incubation Time:18分钟
• Method:稳定表达完整PDGFR和VEGFR的PAE细胞已经生成。对基于细胞的选择性测定，PAE细胞转染完整的人类PDGFR-a，PDGFR-h，或VEGFR-2。细胞以每孔50微升4×105个细胞/毫升的生长培养基(Ham’s F-12培养基，以10%胚牛血清，青霉素和链霉素各50,000单位，500微克/毫升庆大霉素进行补充)接种于96孔板。6到8小时后，用50微升血清耗尽的培养基(如上，但含有0.1%胚牛血清)取代生长培养基，细胞培养过夜。在混合物加入之前，培养基立即用95微升血清耗尽的培养基取代。化合物在100%DMSO中稀释，并将其以DMSO中终浓度为0.25% v/v加入到细胞中，37°C下培养10分钟。用适当配体刺激细胞，按如上方法再培养8分钟。撤掉培养基，细胞用PBS清洗一次，然后将其于室温下在50微升HNTG缓冲液中[每25毫升含20 mmol/L HEPES (pH 7.5)，150 mmol/L NaCl，2% Triton X-100，10% 甘油，5 μmol/L EDTA，2 mmol/L NaVO4，和 1 个不含EDTA完整蛋白抑制片]裂解5分钟。随后裂解产物用50微升HG缓冲液[20 mmol/L HEPES (pH 7.5)，10%甘油]稀释。稀释的细胞裂解物完全混合，50微升上清液转移到ELISA捕获板，室温下搅拌培养2小时。ELISA捕获板通过在96孔ReactiBind山羊抗兔平板上涂覆100微升/孔的5微克/毫升兔抗人PDGFR-h，抗PDGFR-a，或抗VEGFR-2抗体进行60到90分钟制备。在2小时培养结束时，清洗板(PBS, 0.1% 吐温20)，再用抗-磷酸酪氨酸-辣根过氧化物酶抗体(在PBS,0.05%吐温20中稀释)在室温下培养30分钟。将板再次洗涤，然后用四甲基联苯胺培养，如上所诉进行评估。IC50值以对照组的百分比进行计算。

动物实验

• Animal Models:无胸腺雌性大鼠
• Formulation:5%甘油酯
• Dosages:3, 10,或33毫克/千克
• Administration:口服