PF-00562271

PF-00562271是PF-562271的苯磺酸盐，是一种有效的，ATP竞争性，可逆的FAK抑制剂，IC50为1.5 nM，作用于Pyk2比作用于FAK效果低10倍左右，比作用于其他蛋白激酶（除了一些CDKs）选择性高100倍以上。

靶点

体外研究

在重组酶实验中, PF-562271选择性抑制FAK 和 Pyk2 酪氨酸激酶活性，IC50分别为1.5 nM 和14 nM。在细胞实验中，PF-562271 作用于FAK的IC50值为5 nM，比作用于其他激酶靶点选择性更高。在二维培养中，PF-562271 抑制FAK WT,FAK−/− 和FAK 激酶缺乏(KD)的细胞增殖，IC50分别为3.3 μM, 2.08 μM 和 2.01 μM。

体内研究

PF-562271作用于一些人类皮下移植瘤模型，抑制肿瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，且产生最大肿瘤抑制效果，按25 到 50 mg/kg剂量作用于PC-3M, BT474, BxPc3, 和LoVo细胞，每天两次，抑制达78%到94%，没有发生体重降低，生病或死亡。[1]PF-562271 按25 mg/kg剂量口服处理皮下和骨转移PC3M-LUC-5233移植瘤模型，显著降低肿瘤进展。

PF-562271

MB3968

PF-573228

MB3965

TAE226 (NVP-TAE226)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.5023 mL

7.5113 mL

15.0227 mL

5 mM

0.3005 mL

1.5023 mL

3.0045 mL

10 mM

0.1502 mL

0.7511 mL

1.5023 mL

50 mM

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重组激酶实验和酶动力学:
纯化激活的FAK激酶域 (第 410–689位氨基酸)与 50 μM ATP ，和每孔 10 μg Glu 和 Tyr, p(Glu/Tyr)随机肽聚合物,在激酶buffer [50 mM HEPES (pH 7.5), 125 mM NaCl, 和 48 mM MgCl2] 中反应15分钟。使用从1 μM连续稀释的PF-562271 进行p(Glu/Tyr)磷酸化。实验中每种实验浓度重复三次。使用通用 抗磷酸酪氨酸 (PY20) 抗体和随后的辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠IgG抗体检测p(Glu/Tyr) 的磷酸化。加入HRP 底物，加入终止液(2 M H2SO4)，在450 nm处测定吸光值。使用Hill-Slope 模型测定IC50值。使用KinaseProfiler 选择性筛选服务系统通过UpState生物技术进行广谱激酶选择谱研究。

细胞实验

• Cell lines:鳞状细胞癌(SCC)
• Concentrations:0 到1 μM
• Incubation Time:72小时
• Method:细胞接种48小时后，加入PF-562271。加入冰冻25% 三氯乙酸 (TCA) 溶液，混合细胞，3天后，使用 Sulforhodamine B(SRB) 染料染色。使用1% 冰醋酸冲洗实验板，烘干，然后再悬浮在10 mM Tris buffer, pH 10.5中，然后在 540 nm处测定吸光值。拟合曲线，使用GraphPad Prism 4 软件从6次重复测定中获得IC50值。

动物实验

• Animal Models:PC-3M, BT474, BxPc3, LoVo, U87MG, H125 和H460细胞皮下注射到无胸腺雌性小鼠右侧
• Formulation:PF-562271溶于5% Gelucire
• Dosages:≤100 mg/kg
• Administration:口服处理