CHIR-124

CHIR-124是一种新型有效的Chk1抑制剂，无细胞试验中IC50为0.3 nM。比作用于Chk2选择性高2000倍，比作用于CDK2/4和Cdc2活性高500到5000倍。

靶点

体外研究

CHIR-124是喹诺酮类小分子，结构上与其他已知的Chk1抑制剂无关。CHIR-124与拓扑异构酶毒剂(如,Camptothecin 或 SN-38) 相互协同抑制多种癌细胞株生长，包括乳腺癌 (MDA-MB-231和 MDA-MB-435) 和结肠癌 (SW-620 和 Colo205), 这些肿瘤都发生p53突变。CHIR-124 作用于MDA-MD-435 乳腺癌细胞，废除SN-38^ 诱导的S和G2-M期检测点，且增强凋亡。p53缺失增强 CHIR-124造成的G2-M检测点废除和诱导的凋亡。

体内研究

CHIR-124 potentiates the growth inhibitory effects of Irinotecan by abrogating the G2-M checkpoint and increasing tumor apoptosis in an orthotopic breast cancer xenograft model.

Chk1检测:
Chk1 检测中，激酶域在 Sf9 昆虫细胞中表达，含Chk1/Chk2 磷酸化位点的生物素化cdc25c肽，(*)(生物素-[AHX]SGSGS*GLYRSPSMP-ENLNRPR[CONH2]) 作为底物。连续稀释的CHIR-124 与激酶反应buffer混合，激酶反应buffer含终浓度为30 mM Tris-HCl(pH 7.5), 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 4 mM EDTA, 25 mM β-glycerophosphate, 5 mM MnCl2,0.01% 牛血清蛋白,1.35 nM CHK1 激酶域, 0.5 AM 肽底物, 和1 AM 未标记的ATP,及 5 nM33Pγ-标记的 ATP (比活= 2,000 Ci/mmol)。通过放射法进行反应和磷酸转移。反应在室温下进行1到4小时，在含反应终止buffer(25 mM EDTA, 50 mM HEPES, pH 7.5)的链霉素包被的酶标仪上捕获磷酸化肽。使用Europium标记的抗磷酸酪氨酸抗体PT66，通过DELFIA TRF系统测量磷酸肽。使用非线性回归，通过XL-Fit数据分析软件 version 4.1计算CHIR-124达到IC50所需的浓度。

细胞实验

• Cell lines:MDA-MB-231, MDA-MB-435, SW-620, 和COLO 205 细胞
• Concentrations:0-2350 nM, 根据细胞类型
• Incubation Time:48 小时
• Method:对数期MDA-MB-231, MDA-MB-435, SW-620, 和 COLO 205 细胞接种到 96孔板上。在6种不同浓度camptothecin 或 0 nM camptothecin存在时，CHIR-124连续稀释。在无CHIR-124存在时，也连续稀释Camptothecin。化合物加到96孔板的细胞中，然后在37oC下温育48小时。每种处理条件进行一式三份。通过MTS 内盐实验检测细胞增殖。MTS 内盐加到孔板中，再温育3小时，然后使用酶标仪在490 nm下测定吸光值。组合中所使用的每种药物浓度必需达到抑制50%，这样才能绘制等效图。根据Loewe叠加方程 (1= DA/IC50,A+ DB/IC50,B), 进行药物相互等效分析，其中IC50,A和IC50,B为每种药物单独作用抑制50%所需的浓度，DA和DB为联用总体抑制达50%时所需的每种药物浓度。每个图像中存在一个对角线。低于该线的数据点表示协同作用，而高于该线的数据点表现拮抗作用。

动物实验

• Animal Models:MDA-MB-435细胞接种到8-到10-周大的雌性免疫缺陷小鼠的乳腺脂肪垫。
• Formulation:CHIR-124溶于DMSO，然后等分储存在-20oC。
• Dosages:10 mg/kg 或 20 mg/kg
• Administration:口服处理