Enzastaurin(LY317615)

Enzastaurin (LY317615)是有效的PKCβ选择性抑制剂，IC50为6 nM,比作用于PKCα, PKCγ和PKCε选择性高6到20倍。

靶点

PKCβ

PKCα

PKCγ

PKCε

IC50

6 nM

39 nM

83 nM

110 nM

体外研究

Enzastaurin阻断U87MG恶性胶质瘤细胞，PC-3前列腺癌细胞，及HCT116结肠癌细胞的增殖。当Enzastaurin浓度低于1 μM时则可能对HCT116和U87MG细胞有温和的诱导。Enzastaurin阻断许多细胞系如K-562, MOLT-4, HOP-92,和PC-3细胞系的增殖。当Enzastaurin浓度为4μM时可诱导HCT116结肠癌细胞和U87MG恶性胶质瘤细胞凋亡。Enzastaurin诱导HCT116结肠癌细胞凋亡存在剂量依赖性，用4 μM Enzastaurin处理HCT116细胞使TUNEL阳性细胞从基础水平2%涨到50%以上。活体研究显示，Enzastaurin明显阻断HCT116结肠癌细胞和U87MG恶性胶质瘤细胞的生长。Enzastaurin皮肤T细胞淋巴瘤的恶性淋巴细胞凋亡。Enzastaurin和GSK3抑制剂联用,提高细胞毒性水平。Enzastaurin和GSK3抑制剂AR-A014418联用提高β-catenin蛋白水平和β-catenin调节的转录水平。Enzastaurin和AR-A014418联用阻断β-catenin调节的转录。此外，Enzastaurin和AR-A014418联用提高mRNA水平，及CD44表达。

体内研究

与单独使用相比，Enzastaurin结合辐射对异种移植瘤的治疗使微血管的密度产生更大的降低。微血管密度的降低与肿瘤生长延缓相一致。

Go 6983

MB4599

Sotrastaurin

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9395 mL

9.6973 mL

19.3945 mL

5 mM

0.3879 mL

1.9395 mL

3.8789 mL

10 mM

0.1939 mL

0.9697 mL

1.9395 mL

50 mM

0.0388 mL

0.1939 mL

0.3879 mL

激酶实验:
使用滤板法测定髓鞘碱性蛋白基底33P的渗透率，而测定用Enzastaurin阻断PKCβII, PKCα, PKCε,或PKCγ的活性。在96孔板上加100μl反应物进行反应，反应物包括90 mM HEPES (pH 为7.5), 0.001% Triton X-100, 4% DMSO, 5 mM MgCl2, 100 μM CaCl2, 0.1 mg/ml磷脂酰丝氨酸, 5 μg/ml 二乙酰甘油, 30 μM ATP, 0.005 μCi/μl33ATP, 0.25 mg/ml髓鞘碱性蛋白, enzastaurin的连续稀释物 (浓度为1-2,000 nM),及重组人类PKCβII, PKCα, PKCε, 或 PKCγ酶(分别为390, 169, 719, 或128 pM)。加入酶反应开始，在室温下温育60分钟，加入10% H3PO4结束反应，转移到多屏阴离子磷酸纤维素96孔滤板上，温育30到90分钟，过滤，在真空歧管用4体积的0.5% H3PO4冲洗。加入闪烁混合物，板在Microbeta闪烁计数器上读数。

细胞实验

• Cell lines:HCT116和U87MG细胞系
• Concentrations:0.3-4 μM
• Incubation Time:72小时
• Method:

通过核小体分裂和末端转脱氧核苷酰酶调节的缺口末端标记(TUNEL)法标记HCT116和U87MG细胞系，用于测定Enzastaurin的凋亡诱导率。在96孔板上每孔加5×103个细胞（添加FBS的条件培养基），在有（实验组）或没有（对照组）Enzastaurin的环境下温育48到72小时。Enzastaurin的浓度从0.1到10 μM不等。加入原位细胞凋亡检测，荧光试剂进行原位TUNEL染色。在6孔板上，每孔加75×103个HCT116和U87MG细胞，在1% 添加FBS的培养基 ± Enzastaurin环境下温育72小时用Epics流式细胞仪测定荧光标记的DNA链断裂。收集10x103FITC染色的单细胞用于各项试验。

动物实验

• Animal Models:无胸腺裸鼠
• Formulation:溶于水的10% 胶
• Dosages:75 mg/kg，每天两次
• Administration:饲喂处理