Pimasertib (AS-703026)

Pimasertib (AS-703026)是一种高度选择性的，有效的，ATP非竞争性的，MEK1/2变构抑制剂，在MM细胞系中IC50为 5 nM-2 μM。

特性

AS703026是新型，高选择性，有效的MEK1/2变构抑制剂。

靶点

体外研究

AS703026是新型选择性，口服生物有效性的MEK1/2抑制剂，结合到特定MEK变构位点，具有强激酶选择性。AS703026抑制人类多发性骨髓瘤细胞(包括U266和INA-6细胞)生长和存活,IC50分别为5和11 nM。细胞周期停在G0-G1期可调节AS703026的抑制效果，且伴随着MAF致癌基因表达的降低。AS703026作用于MM细胞，通过裂解caspase-3和PARP诱导凋亡。AS703026可有效治疗突变的结肠直肠癌。10 μM AS703026作用于携带K-Ras (D-MUT)突变等位基因的人类结肠直肠癌细胞,有效抑制ERK通路, 增殖，和转化。

体内研究

15和30 mg/kg AS703026作用于人类浆细胞H929MM移植瘤，明显抑制肿瘤生长,与pERK1/2的下调有关，包括PARP裂解,和微管下降。10 mg/kg AS703026作用于人类K-Ras突变 (D-MUT) 的结肠直肠移植瘤，抑制肿瘤生长，且明显降低p-ERK level水平。

U0126-EtOH

MB4068

PD318088

MB4069

Binimetinib, ARRY-438162

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3191 mL

11.5955 mL

23.1911 mL

5 mM

0.4638 mL

2.3191 mL

4.6382 mL

10 mM

0.2319 mL

1.1596 mL

2.3191 mL

50 mM

0.0464 mL

0.2319 mL

0.4638 mL

MEK1酶实验:
AS703026溶于DMSO，最终DMSO浓度为 2.5%。激活的双磷酸化MEK (pp-MEK)实验包含40 μM33P-γATP (AppKm8.5 μM), 0.5 nM 人类激活的MEK1或MEK2, 1 μM激酶无效的ERK2(AppKm0.73 μM)。所有实验Buffer包含20 mM HEPES (pH 为7.2), 5 mM 2-巯基乙醇, 0.15 mg/mL BSA, 和10 mM MgCl2。所有实验中33P- ATP的最终浓度为0.02 μCi/μL。转移30 μL反应混合物到包含12.5% TCA的Durapore 0.45-μm 滤板上，40分钟后，终止pp-MEK激酶反应。烘干滤板，在TopCount上用液体闪烁计数器读数。分析浓度反应数据，测定IC50值。测定起始未磷酸化的MEK(u-MEK)的IC50值, 0.2 nM重组人类 MEK1 或 MEK2 和AS703026在反应buffer中预温育40分钟。加入20 nM B-RafV600E和30 μM ATP，10分钟后，开始磷酸化/激活反应。加入 B-Raf抑制剂 SB590885 (终浓度为100 nM)终止B-Raf活性,在反应Buffer中加入1 μM KD-ERK2 和0.02 μCi/μL33P-ATP测定MEK激酶活性。转移30μL反应混合物到Durapore滤板上，90分钟后，激酶反应终止。然后读数。

细胞实验

• Cell lines:U266和INA-6细胞
• Concentrations:2 nM – 20 μM (储存:10 mM溶于DMSO)
• Incubation Time:48小时
• Method:测定[3H]胸甘渗透率和MTT染料吸光值而测定AS703026细胞毒性。细胞按每孔1×104个培养在96孔板上，培养3天。进行 [3H]胸甘渗透试验, 细胞和每孔18.5 kBq [3H]胸甘脉冲6小时, 收集到玻璃纤维滤板上, 使用β-闪烁计数器读数。通过碘化丙啶(PI)染色，使用液式细胞计检查分析细胞周期。通过膜联蛋白-V/PI染色和液式细胞计检查数据分析测定AS703026诱导的凋亡

动物实验

• Animal Models:携带H929 MM移植瘤的CB17 (SCID)鼠
• Formulation:10 mg/mL, 溶于0.5%羧甲基纤维素/0.25% Tween-20
• Dosages:15或30 mg/kg
• Administration:口服饲喂，每天两次