AZD8330

AZD8330是一种新型，选择性的，非ATP竞争性MEK 1/2抑制剂，IC50为7 nM。

特性

AZD8330是一种新型的有选择性高效率无竞争的针对MEK 1/2的抑制剂。

靶点

体外研究

AZD8330可以有效抑制MEK 1/2。在pERK系统中AZD8330能达到超豪微摩尔级的效力，在MEK 1/2抑制剂敏感的细胞系的功能（扩增）实验中也能达到低至超豪微摩尔级的效力。MEK抑制剂AZD8330特异性抑制促分裂原活化蛋白激酶激酶1(MEK 或 MAP/ERK激酶1)，抑制了生长因子调节的细胞信号传导的过程并抑制了肿瘤细胞增殖。

体内研究

在Calu-6大鼠异种移植药代动力学/药效(PK/PD) 模型中，单一使用AZD8330口服剂量1.25 mg/kg，4到8小时就可以抑制90%以上的ERK磷酸化作用。在Calu-6裸鼠移植瘤模型中，每日一次药用剂量在0.4 mg/kg时就完全可以抑制80%以上的肿瘤生长。在Calu-6模型中，AZD8330抑制肿瘤生长是剂量依赖型的，每天一次剂量在0.3 mg/kg和1.0 mg/kg

Binimetinib, ARRY-438162

MB5452

PD184352 (CI-1040)

MB9629

SL-327

MB4063

U0126-EtOH

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1681 mL

10.8406 mL

21.6812 mL

5 mM

0.4336 mL

2.1681 mL

4.3362 mL

10 mM

0.2168 mL

1.0841 mL

2.1681 mL

50 mM

0.0434 mL

0.2168 mL

0.4336 mL

MEK1酶活性分析:
用杆状病毒感染Hi5昆虫细胞表达，然后利用固相金属亲和层析、离子交换、凝胶过滤的方法纯化出NH2末端六聚组氨酸标记的结构上有活性的MEK1(S218D, S222D ΔR4F)。可以通过检测MEK1将[γ-33P]磷酸从[γ-33P]ATP连接到ERK2上的能力来评估MEK1的活性。首先将25 mM HEPES(pH 7.4), 10 mM MgCl2, 5 mM β-磷酸甘油, 100 μM 钒酸钠, 5 mM DTT, 5 nM MEK1, 1 μM ERK2和0到80 nM的AZD8330 (终浓度 1% DMSO)混合置于在96孔聚丙烯板中，加入10 μM ATP（每孔0.5 μC k[γ-33P]ATP）起始反应，室温孵育45分钟，加入等体积25%的三氯乙酸以终止反应并使蛋白沉淀。沉淀的蛋白与玻璃纤维B过滤板结合，用0.5%的磷酸将剩余的标记ATP洗掉，然后用液体闪烁计数器统计反射性物质的含量。反应混合物种ATP 数量的不同决定了反应的ATP依赖性。实验数据之后全部被拟合

细胞实验

• Cell lines:Malme-3M黑色素瘤细胞
• Concentrations:0 μM -10 μM
• Incubation Time:1 小时
• Method:

把Malme-3M 黑色素瘤细胞接种到96孔板中，在37°C 条件下用不同浓度的AZD8330处理1小时。 然后把细胞固定，通透，与磷酸化ERK抗体和ERK 1/2 的抗体孵育. 将细胞洗涤之后加入荧光二抗.然后将孔板用LICOR 荧光成像系统读数. 把 pERK 的信号强度标准化为总的ERK 信号强度.

动物实验

• Animal Models:携带Calu-6细胞的雌性裸鼠大鼠 (NIH rnu/rnu), 携带SW620细胞的裸鼠大鼠
• Formulation:配制在0.5% 羟丙基甲基纤维素，加0.1% Tween
• Dosages:0.3 mg/kg, 1 mg/kg
• Administration:口服