GW5074

GW5074是有效的，选择性c-Raf抑制剂，IC50为9 nM,对JNK1/2/3, MEK1, MKK6/7, CDK1/2, c-Src, p38 MAP, VEGFR2和c-Fms没有抑制活性。

靶点

c-Raf

IC50

9 nM

体外研究

GW5074是有效的，特异性c-Raf抑制剂，IC50为9 nM,在体外对MEK6, MKK7, p38 MAP激酶和cdks没有抑制活性。然而GW5074处理神经元培养基，使c-Raf和B-Raf的激活修饰累积。GW5074处理小脑颗粒神经元，抑制LK诱导的凋亡，这种作用是非MEK-ERK依赖性的。GW5074延迟下调Akt活性，但通过Akt非依赖性机制抑制细胞凋亡。GW5074影响Ras, NF-kappa B和c-jun。GW5074作用于颗粒细胞和其他神经元类型，抑制神经毒素引起的细胞死亡。

体内研究

GW5074保护Huntington病的体内实验模型。GW5074(5 mg/Kg)处理小鼠，完全抑制3-NP诱导的双侧纹状体病变。GW5074作用于稳定表达人类阿片受体的CHO细胞，完全废除慢性吗啡介导的AC超活化I。GW5074处理小鼠，抑制侧流烟雾引起的气道高反应性。

ZM 336372

MB3922

CEP-32496

MB4070

SB590885

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9196 mL

9.5980 mL

19.1961 mL

5 mM

0.3839 mL

1.9196 mL

3.8392 mL

10 mM

0.1920 mL

0.9598 mL

1.9196 mL

50 mM

0.0384 mL

0.1920 mL

0.3839 mL

亲和力测定:
通常使用纯化的激酶和合成的底物在标准条件下进行体外激酶实验。每组实验使用5-10 mU 纯化的激酶。GSK3β, cdk1, cdk2, cdk3, cdk5实验中,激酶与1 μM GW5074在含8 mM MOPS, pH 7.2, 0.2 mM EDTA, 10 mM 醋酸镁和[c-33P-ATP]的Buffer中在室温下温育40分钟。等样加到P30过滤器上，测量33P渗透率而定量分析激酶活性，然后在50 mM 磷酸中洗涤，进行闪烁计数。Buffer组成包含c-Raf, JNK1, JNK2, JNK3, MEK1, MKK6, MKK7，50 mM Tris pH 7.5, 0.1 mM EGTA, 10 mM 醋酸镁和[c-33P-ATP]。使用的肽底物如下: c-Raf使用0.66 mg/mL MBP;cdks使用0.1 mg/mL 组蛋白 H1;JNKs使用3 μM ATF2; MEK1使用1 μM MAPK2; MKK6使用 1 μM SAPK2a，MKK7使用 2 μM JNK1α。

细胞实验

• Cell lines:皮层神经元
• Concentrations:~5 μM
• Incubation Time:24 小时
• Method:HCA 稀释100倍，调节到pH 7.5。为了测评GW5074对HCA诱导的细胞毒性的影响，GW5074添加到HCA处理的皮层神经元中。24小时后，测定活力。

动物实验

• Animal Models:处理50–55 mg/kg 3-NP 的8周大的 C57BL/6 雄性小鼠
• Formulation:溶于生理盐水
• Dosages:0.5–10 mg/kg
• Administration:腹腔注射