Zosuquidar (LY335979) 3HCl

Zosuquidar (LY335979) 3HCl是一种有效的P-glycoprotein介导的多药耐抗性的调节剂，无细胞试验中Ki为60 nM。Phase 3。

特性

LY335979是P-gp调节的多耐药有效调节剂。

靶点

P-gp
(Cell-free assay) 60 nM(Ki)

体外研究

LY335979 竞争性抑制[3H]vinblastine与P-gp的平衡结合，Ki为 60 nM，通过阻断CEM/VLB100质膜中P-gp的[3H]azidopine的光亲和标记。LY335979 浓度为0.1 μM时，单独给药对药物敏感的MDR细胞系，具有细胞毒性，IC50为6 μM-16 μM，且浓度为 0.5 μM时，完全扭转对 MDR 细胞P388/ADR, MCF7/ADR, 2780AD, 或 UCLA-P3.003VLB溶瘤细胞抗性(Vinblastine, Doxorubicin, 或 Etoposide)。LY335979作用于表达P-gp的白血病细胞系，包括K562/HHT40, K562/HHT90, K562/DOX 和 HL60/DNR，显著恢复药物敏感性，且作用于携带活性P-gp的原发性AML细胞，增强蒽环类药物(Daunorubicin, Idarubicin, Mitoxantrone)和gemtuzumab ozogamicin 的毒性。最新文献说明LY335979作用于ABCB1转导的细胞，完全抑制(Z)-endoxifen在顶端调控的运输。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.5699 mL

7.8494 mL

15.6988 mL

5 mM

0.3140 mL

1.5699 mL

3.1398 mL

10 mM

0.1570 mL

0.7849 mL

1.5699 mL

50 mM

0.0314 mL

0.1570 mL

0.3140 mL

ATP酶实验:
通过测量从ATP中释放的无机磷酸而测量P-gp ATP酶活性。在 96孔板中在37oC下进行实验90分钟。在有或无1 mM 钒酸钠存在时，在含5 mM叠氮化钠, 1 mM 乌本苷, 1 mM EGTA, 3 mM ATP,及 5 mM 磷酸烯醇式丙酮酸和 3.6 单位/mL 丙酮酸激酶 组成的 ATP 再生系统的buffer A（总体积为 100 μL）中，温育膜蛋白 (8 μg-10 μg )。Pgp-ATP酶活性定义为总ATP酶活性中对钒酸盐敏感的部分。加入检测液3分钟后，读数。使用微孔读数器在690 nm处测定吸光值。使用磷酸标准曲线测定形成磷酸的 μmol 数。每组样品重复测量三次。

细胞实验

• Cell lines:CEM/VLB100, P388/ADR, MCF7/ADR, 2780AD, 和 UCLA-P3.OO3VLB.
• Concentrations:0.05 μM 到5 μM
• Incubation Time:72小时
• Method:使用修正的MTT染料减少法测定细胞活性。收集对数生长期细胞，接种在96孔板上。在溶瘤细胞存在时，细胞培养72小时。MCF-7 和 MCF-7/ADR细胞温育24小时，然后加入药物。LY335979 制备成2 nM DMSO 储存液，加到每孔中，终浓度为0.05 到 5 μM。72小时后, 20 μL 新鲜准备的MTT加到每孔中，在 37oC下含5% CO2环境下温育4小时。细胞在Sorvall RT6000B 离心机中制成颗粒状，70 μL培养基小心从每孔中转移，然后加入100 μL 2-丙醇/0.04 N HC1。使用 Multipipettor 使细胞悬浮5到10次，直到看不到可见颗粒。然后立刻在 Titertek Multiskan MCC/340酶标仪流动实验室读数，使用570 nm测试波长，630 nm参考波长。对照组重复测量四次。使用CeliTiter 96 AQueous 检测试剂盒进行毒性分析。

动物实验

• Animal Models:腹腔注射P388或 P388/ADR 细胞的雌性BDF1小鼠
• Formulation:LY335979溶于 5% 甘露醇
• Dosages:≤30 mg/kg
• Administration:腹腔注射或静脉注射