Org27569

Org 27569是cannabinoid CB1 receptor变构调节剂，通过增强激动剂亲和力而诱导CB1受体状态改变，且降低逆向激动剂的亲和力。

特性

诱捕受体与不同的激动剂结合，但没有构象状态的信号。

靶点

CB1

体外研究

Org 27569是CB1大麻素受体的别构调节剂。它显著增加CB1受体与激动剂的结合，并显著降低CB1受体与反向激动剂的特异性结合。Org 27569诱导CB1以高亲和力结合激动剂，受体内化，以及下游ERK磷酸化。变构配体Org 27569促进激动剂与CB1的结合，但是阻断TM6中的构象变化。Org 27569诱捕受体与不同的激动剂结合，但没有构象状态的信号。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4393 mL

12.1966 mL

24.3932 mL

5 mM

0.4879 mL

2.4393 mL

4.8786 mL

10 mM

0.2439 mL

1.2197 mL

2.4393 mL

50 mM

0.0488 mL

0.2439 mL

0.4879 mL

平衡结合试验。:
结合试验以CB1受体激动剂[3H]CP 55,940 (0.7 nM)和CB1受体拮抗剂[3H]SR 141716A (1.2 nM), 1 毫克/毫升BSA 以及包含0.1 mM EDTA和0.5 mM MgCl2的50 mM Tris 缓冲液，pH 7.4，总试验体积为500微升进行。通过加入小鼠脑膜(30微克)启动结合。试验在37°C下进行60分钟，加入冰预冷的洗涤缓冲液(50 mM Tris 缓冲液和1 毫克/毫升BSA)而终止，用在4°C下于洗涤缓冲液中浸泡24小时的24孔取样歧管和Whatman GF/B玻璃纤维过滤器过滤。每个反应试管用4毫升等分试样缓冲液清洗5次。过滤器在烘箱干燥60分钟，然后放在5毫升闪烁液中，放射性通过液体闪烁光谱法进行定量。特异性结合由1μM相应的未标记配体存在和不存在下结合的区别来定义，总结合为70%至80%。

细胞实验

• Cell lines:HEK293
• Concentrations:~10 μM
• Incubation Time:5到15分钟
• Method:细胞表达CB1受体暴露于ORG27569（10μM）5〜15分钟。Fortoxin处理以消除Gi耦合作用，PTX以5纳克/毫升加入培养基。随后在毒素存在下培养18小时，细胞用PBS清洗两次，用化合物处理。细胞用冰预冷的PBS洗涤，细胞裂解物通过冰预冷的裂解缓冲液(150 mM NaCl，1.0% IGEPAL CA-630，0.5%脱氧胆酸钠，0.1% SDS，以及50 mM Tris，pH 7.5包含4-(2-氨乙基)苯磺酰氟，胃蛋白酶抑制剂A，E-64，苯丁抑制素，亮抑酶肽，以及抑肽酶作为蛋白酶抑制剂)处理获得。