TBB(4,5,6,7-四溴-1H-苯并三唑)

TBB是可渗透细胞，ATP竞争型的CK2抑制剂，抑制大鼠肝脏CK2的IC50值为0.15 μM。

靶点

IC50: 1.6 μM (CK2), 11.2 μM (GSK3β), 15.6 μM (CDK2)

体外研究

用33种蛋白激酶对TBB抑制能力的研究显示，在100μm的ATP条件下，对ck2（酪蛋白激酶2）的抑制能力最高（人ck2:IC50=1.6μm）。TBB还抑制其他三种效力较低的激酶：CDK2（IC50=15.6μm）、磷酸化酶激酶（IC50=8.7μm）和糖原合酶激酶3β（GSK3β）（IC50=11.2μm）。所有其他激酶的IC50值比CK2[1]高50倍。当应用适当的给药时间安排时，单独作用或与抗癌剂CPT或TRAIL联合作用的TBB（60μm TBB）可降低雄激素不敏感的pc-3细胞的活力。TBB的时间依赖性活性并非来源于它对pc-3细胞凋亡的影响。TBB是蛋白激酶酪蛋白激酶-2（CK2）的一种ATP/GTP竞争性抑制剂，已与一组33种蛋白激酶（Ser/Thr-或Tyr-特异性）进行了比较。在10μm TBB（和100μm atp）的存在下，只有ck2被显著抑制（>85%），而三种激酶（磷酸化酶激酶、糖原合成酶激酶3L和cyclin依赖激酶2/cyclin A）被中度抑制，IC50值比ck2高出两个数量级（IC50=0.9μm）。TBB也抑制培养的Jurkat细胞内内源性CK2。

体内研究

CX-4945 (Silmitasertib)

MB4012

GSK429286A

MB4013

RKI-1447

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3004 mL

11.5019 mL

23.0038 mL

5 mM

0.4601 mL

2.3004 mL

4.6008 mL

10 mM

0.2300 mL

1.1502 mL

2.3004 mL

50 mM

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TBB溶解于DMSO中储存，然后在使用前用适当的介质稀释。
PC-3或HELA细胞分别在RPMI-1640和DMEM培养基中常规培养，在37°C的加湿空气中添加10%FBS、青霉素（100 U/ml）和链霉素（100μg/ml）。将细胞接种于5×104细胞/孔（PC-3）或2×104（HELA）的24孔培养板中，培养72小时，分别或组合向培养基中加入TBB（终浓度60μm）、CPT（终浓度5.8nM）、2-脱氧葡萄糖（2-DG；终浓度0.5m m）或TRAIL（终浓度13.3ng/ml），培养基中分别或组合培养细胞。或每个数字上指示的额外时间。处理后，去除含有该药剂的培养基，并将500μl MTT混合物（0.5 mg/ml用于PC-3，5.0 mg/ml用于无酚红的培养基中的Hela细胞）添加到每个孔中，并在37°C下再培养1 h。将甲赞晶体在250μl DMSO中稀释。在570 nm处测量吸光度。

动物实验

TBB用20%聚乙二醇400（PEG 400）和2%吐温-80（小鼠）溶解在PBS（pH7.2）中。
小鼠
使用杂合子C57BL/6J小鼠。大黄素和tbb从第11天开始，以每只小鼠50μl或更小体积腹腔注射，剂量为15至30 mg/kg体重，每天两次。对照小鼠单独注射peg tween载体。