Belinostat

Belinostat (PXD101)是一种新型HDAC抑制剂，无细胞试验中IC50为27 nM，对耐Cisplatin的肿瘤具有活性。

特性

Belinostat是Topotarget的领先药物，已经进行过多次临床试验。

靶点

体外研究

Belinostat抑制肿瘤细胞生长(包括A2780, HCT116, HT29, WIL, CALU-3, MCF7, PC3，及HS852)，IC50为0.2到0.66 μM。Belinostat 作用于A2780/cp70 和2780AD细胞时活性很低, 这两个细胞是抗cisplatin和doxorubicin的A2780细胞衍生的。Belinostat通过PARP分裂和组蛋白H3/H4的乙酰化而诱导细胞凋亡。Belinostat抑制膀胱癌细胞生长，尤其是5637细胞,细胞在G0-G1期积累, 在S期下降，在 G2-M期上升。Belinostat抑制细胞生长的活性不受多重耐药表现型的影响, 但是docetaxel的活性明显受影响。Belinostat 可以增强docetaxel或carboplatin 抑制OVCAR-3和A2780细胞的活性。Belinostat作用于卵巢癌细胞系也增强微管乙酰化作用。最新研究显示 Belinostat在TGF-β信号依赖机制中激活蛋白激酶A 和降低survivin mRNA。

体内研究

Belinostat按10mg/kg剂量处理A2780和A2780/cp70 移植瘤，明显延迟肿瘤生长，但是对动物体重没有影响。在鼠膀胱细胞中，Belinostat也诱导p21WAF1, HDAC 核心和细胞通讯基因。Belinostat按100mg/kg剂量单独处理A2780移植瘤，产生抗癌功效，肿瘤抑制率（TGI）达47% ，这种抑制存在剂量依赖性。100 mg/kg Belinostat和40 mg/kg Carboplatin联用可以延迟肿瘤生长，从18.6 天到22.5 天。Bortezomib和Belinostat联用，明显抑制肿瘤，此外，作用于携带抗Bortezomib UMSCC-11A移植瘤的鼠显示肠胃毒性 。

MB6006

Pracinostat (SB939)

MB3565

Quisinostat (JNJ-26481585) 2HCl

MB3746

RGFP966

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.1412 mL

15.7060 mL

31.4120 mL

5 mM

0.6282 mL

3.1412 mL

6.2824 mL

10 mM

0.3141 mL

1.5706 mL

3.1412 mL

50 mM

0.0628 mL

0.3141 mL

0.6282 mL

组蛋白脱乙酰基酶活性实验:
汇合培养，用冷PBS中冲洗2遍，按200×g 转速离心5分钟。 细胞悬浮在2体积的溶解 buffer 中，60 mm Tris buffer (pH 为7.4)包含30%甘油和450 mm NaCl，用干冰冻结，然后30oC水浴溶解，循环3次。细胞碎片按1.2×104g转速离心5分钟, 然后上清液储存于−80oC中。使用 [3H]乙酰 CoA，通过p300的重组蛋白包括次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶域乙酰化组蛋白H4肽段 (序列为SGRGKGGKGLGKGGAKRHRK)。100 μg H4 肽段与次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶buffer（buffer包含50 mM Tris HCl pH为8.0, 5% 甘油, 50 mM KCl, 和0.1 mM EDTA），1 mM DTT, 1 mM 4-(2-氨乙基) ，苯磺酰基氟化物, 1×蛋白酶抑制剂, 50 μL纯化的p300, 及1.85 m [3H]乙酰 CoA (4.50Ci/mmol)混合，最终体积为300 μL，在30oC温育45分钟。p300蛋白 和 20 μL 50% Ni-琼脂糖在4oC下温育1小时，然后离心分离。上清液上样到2 mL Sephadex G15 柱中。加入1毫升蒸馏水，收集三滴样片，重复加入蒸馏水直到体积为4-5 mL，收集40滴样片。用2 mL 闪烁液稀释3微升样片，在闪烁计数板上计数，用于鉴定包含标记肽段的样片。合并样片，测定1 μL组合样本，用于测定每个肽段的放射性。在150 μL buffer，2 μL 细胞抽提物，和2 μL Belinostat的混合液中进行反应。加入2 μL [3H] 标记的底物开始反应。样本在 37oC下温育45分钟，加入HCl 和乙酸(终浓度分别为0.72和0.12 M)终止反应。释放的[3H]乙酸盐加到750 μL of 乙酸乙酯中, 按1.2×104g转速 离心5分钟。上层 (600 μL) 转移到3 mL闪烁液，然后计数。

细胞实验

• Cell lines:A2780, A2780/cp70, 2780AD, HCT116, HT29, WIL, CALU-3, MCF7, PC3，和HS852细胞
• Concentrations:0.016到10 μM
• Incubation Time:24小时
• Method:肿瘤细胞系(A2780, A2780/cp70, 2780AD, HCT116, HT29, WIL, CALU-3, MCF7, PC3，和HS852) 按8×104个细胞/25 cm2瓶接种在5 mL 培养基中，温育48小时。用Belinostat (0.016 到 10 μm)处理细胞24小时。1 mL 胰蛋白酶/EDTA加到培养瓶中。细胞分离后，加入1 mL培养基，细胞再次悬浮。稀释细胞，按0.5-2×103个细胞/皿移到6cm Petri皿中。37oC下温育10到15天。用PBS冲洗细胞，溶于甲醇，用结晶紫染色，计数大于50个细胞的群落。通过IC50值计算敏感度。

动物实验

• Animal Models:右侧腹皮下注射A2780, A2780/cp70和HCT116细胞的CD1 nu/nu鼠
• Formulation:Belinostat 溶解在DMSO中，然后用水稀释，最终浓度10%
• Dosages:≤40 mg/kg
• Administration:腹腔注射