双酶报告基因检测

概览

理论原理

报告基因系统使用两种萤光素酶。其中一种作为目标信号表征，另一种萤光素酶作为内参，通过约化处理，消除由于细胞数、转染效率不同造成的孔间误差，定量更加准确。

所需仪器及主要耗材

仪器：化学发光仪或者带有化学发光功能的酶标仪
耗材：不透明平板（白色或黑色）

方法评价

双酶报告更适用于科研用户，精准测量转录调控，miRNA 靶基因验证等实验。
1.萤火虫萤光素酶（Fireflyluciferase）以及海肾萤光素酶（Renilla luciferase）是最常用的“双报告基因”系统，两者均为单体蛋白，无需翻译后修饰，具有检测反应迅速、简便、灵敏的特点。针对 Firefly/Renilla 萤光素酶组合，美仑推出两款报告基因检测试剂盒：MA0518(闪光型)、MA0520(辉光型)。

2. Nano&Firefly-Glo 双萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，符合高通量检测的需求。该检测试剂盒在同一个样品中先以一种新型萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶（Fireflyluciferase），后以 Furimazine 为底物来检测 NanoLuc 萤光素酶，同时淬灭 Firefly luciferase 的萤光信号，实现双萤光素酶报告基因检测。

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报告基因系统使用两种萤光素酶。其中一种作为目标信号表征，另一种萤光素酶作为内参，通过约化处理，消除由于细胞数、转染效率不同造成的孔间误差，定量更加准确。

针对 Firefly/Renilla 双萤光素酶组合，美仑推出两款报告基因检测试剂盒：MA0518(闪光型)、MA0520(辉光型)。针对 Nano&Firefly 双萤光素酶组合，美仑推出如下试剂盒：MA0522(辉光型)。

用户可以根据实验选择的萤光素酶组合选择相应的双酶报告基因检测试剂盒。

应用交流

1）美仑 MA0518-双萤光素酶报告基因试剂盒可灵敏高效的检测受基因元件调控的Luciferase 表达，通常将转录调控元件或 5’启动子区克隆在 Firefly luciferase 的上游，或把 3′-UTR 区克隆在 Firefly luciferase 的下游，构建成报告基因(reporter gene)质粒。将报告基因质粒（Firefly）和内参质粒（Renilla）共转染细胞，经给药刺激等操作完毕后，裂解细胞并测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase 作为校正转染效率的内参可以消除细胞数量和转染效率的差异。萤火虫萤光素酶催化 Luciferin 发光的最强发光波长为 560nm。海肾萤光素酶催化 Coelenterazine 发光的最强发光波长为 465nm，具体波段选用需依据实验需求和所用仪器进行设定，通常采用全波段接收发射信号即可，不必单独设置。

2）美仑MA0520-Firefly&Renilla-Glo双萤光素酶报告基因检测试剂盒（Firefly&Renilla-Glo LuciferaseReporter Assay Kit）是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，符合高通量检测的需求。该检测试剂盒在同一个样品中先以一种新型萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶（Fireflyluciferase），后以腔肠素（Coelenterazine）为底物来检测海肾萤光素酶（Renilla luciferase），同时淬灭Firefly luciferase的萤光信号，实现双萤光素酶报告基因检测。

相比于美仑闪光型Firefly&Renilla Luciferase Reporter Assay Kit（MA0518），本品Firefly&Renilla-Glo Luciferase Reporter Assay Kit（MA0520）具有以下优点：延长了发光信号的稳定性，近乎2小时的信号半衰期为实验设计提供了更大的灵活性；更符合高通量检测，无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，简化了实验流程；本试剂盒组分做了大量优化，与传统闪光型产品相比，无明显刺激性气味。Firefly&Renilla-Glo双萤光素酶报告基因检测试剂盒可用于多种常用细胞培养液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均为2小时左右（22°C），满足绝大多数高通量实验需求。

3）美仑MA0522-Nano&Firefly-Glo双萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，符合高通量检测的需求。该检测试剂盒在同一个样品中先以一种新型萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase），后以Furimazine为底物来检测NanoLuc萤光素酶，同时淬灭Firefly luciferase的萤光信号，实现双萤光素酶报告基因检测。

相比于美仑辉光型Firefly&Renilla-Glo双萤光素酶报告基因检测试剂盒（MA0520），本品Nano&Firefly-Glo Luciferase Reporter Assay Kit（MA0522）具有以下优点：采用了全新的萤光素酶检测底物（Furimazine）和NanoLuc萤光素酶，具有更高的发光强度，该辉光型试剂盒近乎达到了闪光型双萤光素酶报告基因检测试剂盒（MA0518）的灵敏度；具有更好的发光信号的稳定性，近乎2小时的信号半衰期为实验设计提供了更大的灵活性；高通量检测无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，简化了实验流程；本试剂盒组分做了大量优化，与传统闪光型产品相比，无明显刺激性气味。
Nano&Firefly-Glo双萤光素酶报告基因检测试剂盒可用于多种常用细胞培养液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均为2小时左右（22°C），满足绝大多数高通量实验需求。

4） 双酶报告基因数据处理：
双酶报告基因数据处理一般将目标报告基因读数与内参读数进行约化（必要时，可以先各自扣除背景读值），然后再将得到的比值数据与对照组进行归一处理，得到相应的变化倍数，再以此做图。

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