产品描述:
Bicinchoninic acid (BCA)法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似,即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu+。BCA与Cu+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比,BCA蛋白测定方法灵敏度高,操作简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳,并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比,BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
BCA法在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系,其最小检出量为25μg/mL。
产品优势:
- 与Lowery法相比,BCA蛋白测定方法灵敏度高,操作简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳,并且受干扰物质影响小。
- 与Bradford法相比,BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响,对于5%以内的SDS、Triton X-100、Tween 20、 Tween 80都具有非常好的兼容性。
保存条件:
BCA试剂A、试剂B和蛋白标准配制液常温保存。蛋白标准(BSA)请于2-8℃保存,配制成溶液后-20℃保存。
注意事项:
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- BCA蛋白定量试剂盒不受大部分样本中其他成分的影响,对于5%以内的SDS、Triton X-100、Tween 20、 Tween 80都具有非常好的兼容性。但BCA法测定蛋白浓度易受金属螯合剂、高浓度的还原剂影响。在BCA法测定蛋白浓度前,请保证EDTA浓度≤10mM; DTT浓度≤1mM,2-ME≤0.01%。
- 蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白标准配制液后,即获得蛋白标准原液,该原液中含有防腐剂,不影响后续检测,该蛋白标准原液-20℃长期保存。
- 建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
- 试剂在低温条件或长期保存出现沉淀时,可搅拌或37°C温育使其溶解,如发现细菌污染则应丢弃。
- 当溶液A、B混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失,BCA工作液建议现配现用。
- 样品检测后的A562值应在标准曲线范围之内,若超过此范围则需将样品酌情稀释后重新测定。
- 如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但测定时,需根据比色皿考虑最小检测体积。按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于最小检测体积,样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作指南:
请参考说明书
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