Meilunbio®低飞克极超敏ECL发光液

¥150.00¥1,300.00

英文名字:Meilunbio®West Femto Maximum Sensitivity Substrate
质量标准: Meilunbio,极超敏低飞克级

货号: MA0187

产品描述:

本试剂盒是一款以鲁米诺(Luminol)作为化学发光底物的低飞克极超敏的ECL化学发光试剂盒。其工作原理是:以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体直接或间接结合膜上的目的蛋白,在洗膜后加入ECL工作液,在其碱性环境下,鲁米诺由HRP催化发光,然后通过X胶片或者化学发光成像系统来检测结果。

本试剂盒使用了优化的增强剂和氧化剂,提高了试剂盒的稳定性和检测灵敏度,对抗原的最低检测限可达到低飞克级。在Western Blot实验中,一抗(1mg/mL)储存液可稀释1:5,000至1:100,000倍,二抗(1mg/mL)储存液可稀释1:100,000至1:500,000倍,发光信号强且较持久。Meilunbio®低飞克极超敏ECL发光液特别适用于丰度较低或痕量目的蛋白的检测,对于常规的WB或者丰度较高的蛋白检测,可选择使用Meilunbio®飞克特超敏ECL发光液(美仑货号:MA0186)。

产品优势:

  1. 灵敏度极高:可检测低飞克级抗原。
  2. 信噪比高:样品发光信号强,条带清晰且背景值低。
  3. 发光稳定性好:可重复曝光。
  4. 工作液稳定性好:4℃条件下,6h内工作液与现配的一致。
  5. 降低成本:可使用更高的抗体稀释倍数,大大节省抗体。

实验数据:


图1.使用Meilunbio®低飞克极超敏ECL发光液与进口T公司West Femto发光液进行内参及非内参抗体不同浓度蛋白的WB检测结果图

操作方法:详见说明书

注意事项:

  1. 本ECL试剂盒灵敏度高,需要优化好样品上样量、凝胶类型、转膜方法、膜类型、封闭试剂、一抗/二抗浓度及相应孵育时间等,并按照蛋白表达丰度,参考推荐的抗体稀释比例,来获得最佳实验结果。
  2. 如果印迹膜上条带过亮时,建议使用我公司生产的膜再生液(MA0181)去除抗体后重新封闭孵育,并提高一抗二抗稀释比例。如果条带过暗也可将二抗稀释比例降低至1:5000至1:10,000倍,以达到最佳效果。
  3. 本试剂盒A液和B液不可以相互污染,否则会降低产品的使用效果。
  4. 各组分使用后,请拧紧瓶盖,以防污染。
  5. ECL工作液孵育时间不宜过长,延长孵育时间不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。
  6. 若想节约试剂,可适当将膜剪小,但请勿稀释发光液,因为发光过程的本质是酶促反应,使用过少的底物不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和灵敏度明显降低。
  7. 发光强度会随时间缓慢减弱,建议在曝光后两小时内完成实验。
  8. 孵育二抗后,洗膜缓冲液应避免使用叠氮钠,因为叠氮钠是HPR的抑制剂。
  9. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会造成淬灭荧光,请选择高质量保鲜膜。
  10. 为了您的安全和健康,请穿戴实验服并戴一次性手套操作。

保存条件:

2-8℃避光保存,自生产之日起12个月有效。

运输条件:

湿冰运输(按季节)

常见问题解决方案:

遇到的问题 原因分析 推荐解决方法
胶片出现反影  

 

反应系统中HRP量过多

 

 

稀释HRP标记物

膜上出现棕色或

黄色条带

暗室中观察到强烈发光
条带有空斑
发光信号持续时间短 保鲜膜、显影液或定影液污染 使用优质试剂耗材,规范操作,避免污染
反应系统中HRP量过少 增加HRP标记物
胶片无条带显现或者信号较弱 蛋白质表达量低或降解 适当增加上样量或提高抗体的使用浓度
转膜的效率低 适当增加转膜时间或提高转膜效率,用预染Marker判断
膜的选择不合适 小蛋白更适合于PVDF膜
抗原、抗体量少或不匹配 增加抗原/抗体量或选择合适抗原/抗体
X光胶片有问题 曝光后X光谱全黑(而非透明色),则表明胶片已完全曝光,使用新的X光片
显影/定影液有问题 可预先曝光一张胶片进行判断,如有问题当换用新的显影/定影液
曝光时间过短 适当的延长曝光时间
高背景 反应系统中HRP量过多 稀释HRP标记物,延长封闭时间
抗体未清洗干净 增加洗膜次数
封闭不完全 优化封闭条件
使用错误的封闭剂 使用其他的封闭剂
过度曝光 降低曝光时间
非特异性条带 一抗用量过多或者特异性较差 减少一抗稀释比例或者更换一抗
SDS引起蛋白非特异性结合 实验流程中避免使用SDS
条带弥散或形状怪异 制胶问题 配胶时要保证充分混匀,均匀凝胶,并用针头将胶孔拨正吹出孔内的气泡
上样量大 上样时需保证样品量一致且适当,并且含较低的盐离子浓度
电泳时电压、电流过高导致电泳液过热 建议使用合适的电泳条件并保持低温
ECL发光液失效 过了保质期 建议更换新的ECL发光液
未避光保存 发光液中鲁米诺等成分需避光保存,否则容易失活
AB液交叉污染 规范实验操作,吸取不同的液体需更换枪头

 

规格

10mL, 100mL, 500mL

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