Caspase1活性检测试剂盒

¥500.00¥1,600.00

英文名字:Caspase1ActivityAssayKit
质量标准:Meilunbio,
货号: MA0327

产品描述

  • Caspase 1活性检测试剂盒(Caspase 1 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 1酶活性或纯化的caspase 1酶活性的试剂盒。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也称interkeukin1β conberting enzyme (ICE),有时被写作caspase-1或caspase 1,是caspase家族中唯一可 以剪切IL-1β前体蛋白或IL-18前体产生相应成熟的细胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1前体蛋白,产生20kD和10kD的片段,这两个片段可以形成异源二聚体(heterodimer),并进一步由两个异源二聚体形成四聚体。caspase 1可以通过剪切其凋亡Bcl-XL来调节细胞凋亡,并通过其对一些细胞因子前体的剪切来调控相关免疫反应。
  • 本试剂盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 1的活性。pNA在405nm附近有强吸收。本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时,除标准曲线外可以检测20个样品(20T)或者100个样品(100T)。
产品内容
产品组成 20T 100T
裂解液(Lysis buffer) 8ml 30ml
检测缓冲液(Assay buffer) 8ml 20ml
Ac-YVAD-pNA(2mM) 200ul 1ml
pNA(10mM) 200ul 1ml
说明书 1份 1份

实验数据


上图是取自同一瓶进入衰亡期的C6细胞,使用我公司和其他进口品牌Caspase1 活性检测试剂盒,加入底物孵育0h, 2h, 4h, 6h,分别记录酶标仪A405nm检测结果。图中蓝色柱子表示blank组,红色柱子是应用美仑公司产品检测结果,绿色柱子代表其它进口品牌检测结果,可以看出,我公司产品检测效果要优于其他进口品牌。

操作步骤
Caspase1 酶活性的检测:

  1. 取出适量的Ac-YVAD-pNA (2mM),置于冰浴上备用。
  2. 如下设置反应体系:
    项目 空白对照 样品
    注意:在设置反应体系时先加检测缓冲液,再加待测样品,适当混匀,注意避免在混匀时产生气泡。随后再加入10μlAc-YVAD-pNA (2mM)。
    检测缓冲液 40μl 40μl
    待测样品 0μl 50μl
    裂解液 50μl 0μl
    Ac-YVAD-pNA (2mM) 10μl 10μl
    总体积 100ul 100ul
  3. 加入Ac-YVAD-pNA (2mM)后混匀,注意避免在混匀时产生气泡。37ºC孵育60-120分钟。发现颜色变化比较明显时即可测定A405。如果颜色变化不明显,可以适当延长孵育时间,甚至可以孵育过夜。
  4. 样品的A405扣除空白对照的A405,即为样品中caspase 1催化产生的pNA产生的吸光度。通过同步骤1中获得的标准曲线对比就可以计算出样品中催化产生了多少量的pNA。
  5. 参考Chemicon公司的caspase 1酶活力单位的定义:One unit is the amount of enzyme that will cleave 1.0nmol of thecolorimetric substrate Ac-YVAD-pNA per hour at 37ºC under saturated substrate concentrations。即一个酶活力单位定义为当底物饱和时,在37ºC一个小时内可以剪切1nmol Ac-YVAD-pNA产生1nmol pNA的caspase 1的酶量。这样就可以计算出样品中含有多少个酶活力单位的caspase 1。说明:在本试剂盒的检测体系中,底物的起始浓度为0.2mM,此时底物是饱和的,对于许多样品而言在37ºC孵育2个小时以内底物都是饱和的;对于样品中caspase 1酶活力特别高的情况,须用裂解液适当稀释样品后再进行测定。
  6. 用Bradford法检测待测样品中的蛋白浓度(由于裂解液中含有较高浓度的DTT,不适合采用BCA法进行蛋白浓度测定)。这样就可以计算出一个样品单位重量蛋白中所含的caspase 1的酶活力单位。

保存条件

-20℃保存,Ac-YVAD-pNA和pNA需要避光保存。

规格

20T, 100T

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