产品描述：
支原体在自然界分布广泛，无细胞壁，直径为0.1-0.3μm，且形态易变，极易通过除菌过滤器，通常附着在细胞膜上生长，普通细胞培养用抗生素对其无效。支原体污染发生后，细胞外形可能没有明显的变化，细胞也不会死亡，培养基一般不发生浑浊，严重污染时表现为细胞生长速度变慢，状态变差，细胞形态改变，改变细胞新陈代谢，抑制细胞生长，导致染色体畸变，细胞膜抗原性改变，细胞复苏后存活率降低等。在细胞培养过程中如果在显微镜下发现破碎的细胞很多，培养基pH变化明显，需要频繁更换新鲜培养基才能维持传代培养的时候，即应怀疑支原体污染。
细胞污染常见的支原体种类有：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）、发酵支原体（M. fermentans）、人型支原体（M. hominis）、唾液支原体（M.salivarium）、肺炎支原体（M.pulmonis）和梨支原体（M.pirum）等。支原体检测方法有：培养法、指示细胞（DNA染色）法、NAT核酸扩增（PCR/qPCR）法、ELISA法及扫描电镜法等。
本试剂盒采用探针法qPCR高灵敏检测细胞培养等生物材料中（如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清）污染的支原体，包含抗体法热启动Taq酶、探针、引物、内部对照、阳性对照等qPCR所需所有组分。本试剂盒利用特异性引物与荧光探针（一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质）结合，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光。通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量，可以大大提高支原体检测的特异性和灵敏度。
产品优势：
- 节省时间—可直接检测含支原体的细胞培养基上清等样品，无须提取DNA；仅1个小时的实时荧光定量扩增即可实现常规培养方法中一周甚至一个月时间才能完成的支原体检测。
- 使用方便—引物和探针预混设计，方便操作；提供了阳性对照及内部对照，便于确定PCR是否正常，样品中是否存在抑制PCR反应的物质以及是否出现假阴性。
- 检测灵敏性高—使用抗体法热启动Taq酶，检测限度在10CFU以下。
- 特异性好—特异性引物设计，采用qPCR探针方法，人源、鼠源细胞，以及细菌、真菌均不会检出。
- 抗干扰能力强—培养体系中的添加物、不同种类的培养基不会影响检测结果。
- 兼容性好—至少可以检出39种细胞污染常见支原体。
保存方法：
-20℃保存，自生产之日起12个月有效。其中Primer & Probe Mix需要避光保存，尽量避免反复冻融。
Positive Control Template和Internal Control Template长期不用时可置于-80℃冷冻保存。
注意事项：
- 所有试剂在使用前于冰上彻底解冻、混匀，混匀过程中尽量避免产生气泡，使用完毕后于-20°C保存。
- 试剂中含有荧光染料，保存或进行PCR反应时尽量避光操作，以避免荧光淬灭问题。
- 每次实验必须设置阴性对照、阳性对照，实验组建议设置样品模板梯度和复孔，至少以两个复孔重复结果为准，避免出现假阳性或假阴性。
- qPCR反应板封膜或盖盖子时须反复压紧。为避免影响荧光信号读取，请注意不要在管盖或者膜上做标记，或者用刮板反复摩擦。
- qPCR是超灵敏的检测方法，操作时必须佩戴口罩，严格按照qPCR操作标准，防止引入外源污染影响实验结果。
- 为了确保细胞实验的可靠性及稳定性，建议定期进行支原体污染检测。
- 如果检测出有支原体污染，需要清除或预防支原体，可以使用支原体预防或清除试剂（美仑货号：MA0339、MA0340）。
- 建议使用带滤芯的吸头配制qPCR反应体系，防止污染导致假阳性。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。