| 产品组成 | 100T | 1000T |
|---|---|---|
| NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer | 10ml | 100ml |
| NANOLIGHT Luciferase Substrate(50x) | 200μl | 1ml x 2 |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
产品简介：
NANOLIGHT萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，符合高通量检测的需求。NANOLIGHT萤光素酶是一个经过基因工程改造的小分子酶(19.1kDa)，是性能卓越的生物发光报告基因。它使用一种新型底物，可产生高强度、辉光型发光。信号强度是萤火虫以及海肾萤光素酶的150倍；超强信号稳定性，半衰期可达2小时。 NANOLIGHT萤光素酶的生物发光反应不依赖ATP，自发光背景低，光信号更亮，同时抑制背景发光以获得最高检测灵敏度。
反应原理如下：
新型底物 + O2NANOLIGHT Luciferase 产物 + CO2 + Luminescence
使用说明：
1.自备材料
PBS；多道排枪；白色不透光细胞培养板；化学发光仪或酶标仪。
2.检测前准备
- 预先将NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer放置于室温融化。
- 取出NANOLIGHT Luciferase Substrate (50x)，每次开盖前需进行短暂低速离心。
- 根据实际使用量，以50:1的比例将适量的NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer与NANOLIGHT Luciferase Substrate (50x)混匀，室温避光备用。例如：如果需要100ml反应液，则需要加入2ml的检测底物。
注意
建议现配现用，剩余的含有新型底物的反应液在当次实验结束后，直接舍弃，不要留存。
3.操作方法
- 从细胞培养箱中取出细胞培养板，放置5-15min，恢复至室温。
注意
使用白色不透光的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
- 加入检测溶液
使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer，加样体积与细胞培养液体积相同并混匀。例如，96孔板通常加入80-100ul培养液，相应加入80ul-100ul检测溶液；384孔板通常加入20-30ul培养液，相应加入20-30ul检测溶液。 - 孵育
室温下孵育5-10min。为了使得细胞裂解充分，也可将细胞培养板放在振荡混匀仪或附带振板功能的仪器上，室温条件下，采用中高速振板5-10min。
注：孵育时间，可根据细胞量进行适当调整，确保细胞充分裂解，得到稳定的发光检测结果。 - 检测
混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测NANOLIGHT Luciferase报告基因活性。
注意
为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后2小时内完成检测。
注意事项：
- 检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色细胞培养板。
- 由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
- 酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
- 如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。
- NANOLIGHT萤光素酶具有超强信号稳定性，半衰期可达2小时。但是当酶表达量过高时，信号半衰期会缩短，建议优化实验设计方案（如减少质粒转染量），避免萤光素酶表达量过高。
保存条件：
全新试剂盒-20℃保存，一年有效。
短期运输条件：
避光冷藏。
数据展示
关键词：荧光素酶