产品描述：
乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒（LDH Cytotoxicity Assay Kit）是一种基于WST-8的显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase, LDH）活性或检测其它样品中的LDH活性的试剂盒。本试剂盒的基本原理如下：LDH是绝大部分哺乳动物活细胞中都存在的酶，受损细胞所释放出的LDH催化乳酸（Lactate）生成丙酮酸（Pyruvate），并伴随着NAD+到NADH的转化。NADH通过电子载体可将水溶性四唑盐WST-8还原成水溶性的橙色甲臜产物（Formazan），在490nm波长下产生吸收峰，甲臜产物的吸光度与LDH的量呈正相关，利用此原理可以测定死细胞和受损细胞的数量。该酶联反应原理的示意图如下。
本试剂盒所采用的WST-8法跟经典的INT法相比，检测反应迅速、灵敏度更高，吸光度变化更大，检测结果更准确。可以用于常规的LDH活性的检测，尤其适用于以LDH释放为指标的细胞毒性/损伤检测。同时，基于细胞裂解后LDH活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖。本试剂盒搭配CCK-8（MA0218/MA0225）检测，可作为细胞毒性双指标认证，更适合Car-T、ADCC、CDC等效靶杀伤实验。
本试剂盒中试剂不会和活细胞反应，而且对细胞无损害，可以直接添加到含有细胞的培养基中检测（一步法），也可以取细胞上清检测（低损伤法，分离的细胞可以做其他实验）。
产品优势：
■ 双重选择—有两种检测方法可供选择（一步法、低损伤法）
■ 灵敏度高—反应迅速，吸光度变化大，检测结果准确
■ 操作便捷—使用一步法不需要离心
■ 双重验证—与CCK-8联用可更全面评估细胞活力和细胞损伤
保存条件：-20℃避光保存，自生产之日起12个月有效。建议将试剂分装保存，避免反复冻融导致产品失效，干扰实验测定。试剂盒解冻后可以短期于2-8℃保存，3天内有效。
运输条件：干冰或湿冰运输（按季节）。
操作方法：详见说明书
注意事项：
1.动物血清中的LDH活性较高时，可以通过降低血清浓度来减小其中的LDH造成的背景吸收，一般有两种解决方法：①将血清浓度降低到5%会显著减小背景而不影响细胞活力。不推荐用1% BSA来代替血清检测细胞介导的细胞毒性。②使用灭活血清，这样血清中的LDH背景会大幅度下降。
2.待检样品准备好后建议当天完成测定，如果暂时无法测定，则请置于2-8℃，可放置2-3天。不建议置于-20℃，会使样品中部分LDH失活。
3.细胞过度生长、密度过高、状态不佳、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放LDH增加。不同种类、不同状态的细胞LDH的含量也存在一定差异。
4.未加终止液时，随着时间延长，吸光度会逐渐增大。加入终止液后，显色可以避光稳定保存48小时。
5.如果酶标仪没有490nm滤光片，也可以使用450nm滤光片，吸光度会高于490nm。
6.CCK-8以细胞活性为指标，本试剂盒以游离的LDH为指标，两种指标检测存在差异性，二者联用，能更全面的表征细胞毒性。
7.如果待测体系中存在氧化还原物质则可能会干扰检测结果，还原性物质会使吸光度增加，氧化性物质会使吸光度减小，因此应需设法去除这些物质的影响。
8.当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
9.为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
数据展示：
一：细胞数标准曲线的检测
- 低损伤法
方法：将Vero、RAW 264.7、Hela、HCT 116、HL-60、THP-1、4T1、Jurkat、K-562分别以一定的细胞密度进行倍比稀释铺96孔板，待贴壁细胞贴壁后分别将美仑及进口T品牌的Lysis Buffer加入细胞液中，继续静置反应30min后，离心使细胞沉淀。从每个孔中吸取100μl上清液于新的96孔板中，分别将美仑及进口T品牌检测工作液以100μl/孔加入孔板中，避光室温反应30min后分别将美仑及进口T品牌的Stop Solution以50μl/孔加入孔板中，用酶标仪以490nm波长进行检测，并绘制标准曲线。
结果：美仑LDH检测试剂盒反应更迅速，细胞数标准曲线趋势与进口T品牌一致，线性良好，斜率＞进口T品牌，灵敏度更高。
图1. 低损伤法细胞LDH检测标准曲线图
- 一步法
方法：Vero、RAW 264.7、Hela、HCT 116、HL-60、THP-1、4T1、Jurkat、K-562分别以一定细胞密度进行倍比稀释铺96孔板。待贴壁细胞贴壁后分别将美仑及进口T品牌的Lysis Buffer加入细胞液中，继续静置反应30min，分别加入美仑及进口T品牌检测工作液，避光室温反应30min后分别加入美仑及进口T品牌的Stop Solution，用酶标仪以490nm波长进行检测，并绘制标准曲线。
结果：美仑LDH检测试剂盒反应更迅速，细胞数标准曲线趋势与进口T品牌一致，线性良好，斜率＞进口T品牌，灵敏度高，满足一步法检测需求。
图2. 一步法细胞LDH检测标准曲线图
二：细胞毒性检测
方法：按照说明书分组和步骤，将A549、THP-1分别铺入96孔板，待细胞贴壁或静置后加入不同浓度的阿霉素DOX，继续培养48h后分别加入CCK-8溶液（MA0225）、美仑及进口T品牌LDH检测工作液，避光室温反应30min后，用酶标仪以490nm波长及450nm波长进行检测，并绘制药物浓度-吸光度曲线。
结果：美仑LDH检测试剂盒检测细胞毒性所得的吸光度跨度更大，药物浓度-吸光度曲线趋势与进口T品牌相似。CCK-8试剂盒以细胞活性为指标，LDH检测试剂盒以游离的LDH为指标，实验证实两种指标测得的IC50存在差异性。二者联用，能更全面的表征细胞毒性。
图3. CCK-8法与LDH法细胞毒性检测结果图