产品简介:
品牌:meilunstar
别名:CY5-NHS酯; CY5 NHS ESTER,Cy5-SE
分子式:C37H43N3O10S2
分子量:753.88
溶解性:溶于水;DMSO
EX激发波长:646 nm
EM发射波长:664nm
用途:
花菁染料Cy5,常被应用于生物分子标记,荧光成像及其他荧光生物分析。他们广泛应用于多肽,蛋白,核苷酸等。Cy5染料具有增强荧光结合后的蛋白质。
储存条件:
避光 -20°C避光
运输条件:
2~8℃运输
使用方法推荐(仅供参考)
水溶性Cy5 NHS标记 (D-ser2)-leucineenkephalin
- Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL DMSO后,加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate ( 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。(Dye 和peptide 投料比是 1:1)
- 然后加入15 μL三乙胺,常温避光搅拌反应混合物过夜。
- 用HPLC 纯化蛋白,使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm),每次上样注入2×400 μL,30分钟梯度洗脱;从0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30,流速4mL /min。(对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相)
- 收集适当的色带峰,标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。
- 产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中,-20℃避光储存;必要时可用质谱表征。
- CyDye标记的蛋白稳定性取决于蛋白本身。例如标记的IgG在4 ℃可避光保存2月;更长期的保存需加入等体积的甘油-20 ℃避光保存。
F/P计算: |
Cy5 在650 nm 的摩尔吸光系数为250 000 M-1 cm-1 ,所用蛋白在280 nm处的摩尔吸光系数为 170000 M-1 cm-1; Cy5在280nm处的吸收是650nm处的5%。按以下公式计算F/P值。 [Cy5 dye] = (A650)/250 000 [peptide] =[A280 -(0.05×A650)]/170000 F/P final= [dye]/[peptide]= {0.68×A650}/ {A280 – (0.05×A650)} |