分子量:10000 Da (Average)
简介:FITC-Dextran (MW 10000) 是一种标记物,由与10kDa葡聚糖偶联的异硫氰酸荧光素组成。FITC-Dextran (MW 10000) 可作为一种标记物来揭示热休克引起的细胞损伤,并研究细胞凋亡的早期和晚期阶段。FITC-Dextran (MW 10000) 还可用于细胞渗透性的研究,如血脑屏障通透性以及血脑屏障破坏程度的测定。
别名:荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖(MW 10000);FITC-葡聚糖;FITC-右旋糖酐;异硫氰酸荧光素标记葡聚糖;FITC标记葡聚糖;FITC标记右旋糖酐
物理性状及指标:
外观:………………橙黄色粉末
含量:………………≥95%
EM(nm):……………519
EX(nm) :……………494
FITC修饰率:………1:50~1:80
运输条件:湿冰运输(按季节)
产品用途:科研试剂,仅限应用于分子生物学、药理学等科研方面,严禁用于人体。FITC-Dextran可用于评估体内/体外大分子对半透膜的通透性,可实现对血流、膜损伤、血管引流和肾脏清除等过程进行检测。常用于心血管、微循环、细胞单层空隙/运动、灌注、细胞膜渗透性、细胞内吞等研究。在结肠炎研究方面,FITC-Dextran 可用于动物的灌胃,进行胃肠屏障功能测定/肠道通透性检测。
使用方法:(数据来自公开文献注意仅供参考,我司不保证按照此方案造模成功,具体需要自己摸索设计)
肠道通透性检测:
1、实验前准备:
1)3%DSS溶液:称取15g DSS(美仑货号MB5535)溶解于500mL无菌的饮用水中,现配现用;也可以使用DSS专用溶剂(美仑货号MA0650)配制,2~8℃可保存1个月。
2)30mg/mL FITC-Dextran(MW 10000) 溶液:称取300mg FITC-Dextran(MW 10000)溶解于10mL生理盐水中,现配现用。
3)FITC-Dextran浓度校准曲线制备:建议使用0.2μg/mL~15.0μg/mL浓度范围作为标准范围,并进行标准曲线的绘制。
- 稀释液配制:稀释液建议使用与样品相同比例的正常小鼠血浆与生理盐水(或PBS)的稀释剂。例如,如果使用1:2比例进行样品稀释,则稀释剂为:300μL正常小鼠血浆+600μL PBS。
- 母液配制:取10μL 30mg/mL的FITC-Dextran,加入990 μL的生理盐水,FITC-Dextran终浓度为300 μg/mL。
- 按照下表进行来稀释FITC-Dextran标准曲线:
编号 | 稀释液体积(μL) | 蛋白标准溶液体积(μL) | 最终高浓度(μg/mL) |
A | 380 | 从母液取20 | 15.0 |
B | 200 | 从A管取200 | 7.5 |
C | 200 | 从B管取200 | 3.25 |
D | 200 | 从C管取200 | 1.63 |
E | 200 | 从E管取200 | 0.82 |
F | 200 | 从F管取200 | 0.41 |
G | 100 | 从G管取100 | 0.2 |
H | 200 | 0 | 0 |
2、实验步骤:
1)肠炎模型建立:3%DSS溶液替换饮用水,BALB/c雄性小鼠连续饮用7天,观察小鼠一般情况,判断造模是否成功。
2)分组:设置空白组、阴性组、空白对照组、模型组
3)给药:检测前禁食4~12小时,然后按照下表进行给药:
分组 | 空白组 | 阴性组 | 空白对照组 | 模型组 |
动物处理 | 正常小鼠 | DSS肠炎模型小鼠 | 正常小鼠 | DSS肠炎模型小鼠 |
药物溶液 | 生理盐水 | FITC-Dextran(MW 10000) 溶液 | ||
给药剂量 | 与模型组等体积给药 | 600mg/kg |
4)样品处理:给药4小时后取血,2500rpm离心15分钟,取血浆备用。
注:血浆样品可直接检测,也可使用生理盐水或PBS稀释后进行检测,但与标曲稀释剂及稀释倍数需保持一致。
5)浓度检测:
- 取50μL或100μL上一步骤已稀释好的不同浓度FITC-Dextran标准溶液和待测样品依次加入到不透光96孔酶标板中。
- 使用荧光酶标仪检测荧光值(激发波长490nm,发射波长520nm)。
- 以FITC-Dextran标准的浓度为横坐标,荧光值为纵坐标,注意荧光值应减去空白组的荧光值,绘制标准曲线,得出线性公式及R2值。
- 按照上一步骤所得公式,根据所测得的待测样品荧光值,计算对应样品中FITC-Dextran浓度。
【注意】
- 我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养和动物实验,请提前做预处理(如0.22μm滤膜过滤),除去热原细菌,否则会导致染菌。
- 部分产品我司仅能提供部分信息,我司不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。