VX-680/MK0457，陶扎色替

Tozasertib (VX-680, MK-0457)是一种pan-Aurora抑制剂，对Aurora A作用最强，无细胞试验中Kiapp为0.6 nM，而对Aurora B/Aurora C的作用较弱，对Aurora A选择性比其他55种激酶高100倍。

靶点

体外研究

虽然VX-680具有多激酶特性，VX-680却诱导相似的细胞毒性，IC50约为300 nM，在G2/M期，核内复制期，及转染ABL或FLT-3激酶的BaF3细胞凋亡时，显示一个Aurora B 类似的抑制表现型。VX-680抑制CAL-62细胞增殖，这种作用存在时间依赖性。用VX-680处理14天，明显降低群体的数量和大小，处理8305C下降达到70%，处理CAL-62, 8505C,和BHT-101下降达到90%。用VX-680处理不同ATC细胞，抑制细胞增殖，IC50为25到150  nM，这种作用存在时间和剂量依赖性。在软琼脂中，VX-680明显削弱不同细胞系形成群落的能力。caspase-3的活性分析显示VX-680诱导不同细胞凋亡。VX-680处理CAL-62 细胞12小时，形成DNA含量≥4N细胞累积物。微速摄影分析显示VX-680处理的CAL-62细胞离开细胞中期。VX-680可以抑制组蛋白H3的磷酸化作用。VX-680作用于携带T315I突变的BCR-Abl的病人样本，具有明显抑制活性。

体内研究

VX-680作用于人类AML(HL-60)移植瘤模型明显降低肿瘤尺寸。VX-680按75 mg/kg剂量给药实验鼠,每天腹腔注射两次，持续13天,与对照组相比，平均肿瘤体积下降达98%。肿瘤体积比实验之前初始体积小很多。按12.5 mg/kg剂量每天给药两次，肿瘤生长也明显降低，这种作用存在剂量依赖性。VX-680耐受性很好，只有在使用高剂量时可以观察到实验动物体重稍微降低。通过比较cisplatin,按5.4 mg/kg剂量给药，每四天腹腔注射一次，一共进行三次，抑制肿瘤生长只达9%。VX-680作用于胰脏和结肠移植瘤，也引起肿瘤衰退。VX-680静脉注射给药携带HCT116肿瘤的实验鼠，显示很强的抗癌活性。使用高剂量VX-680(每小时2 mg/kg)处理，明显提高效果，比实验钱的初始肿瘤平均尺寸下降56%。

Aurora A Inhibitor I

CL-10427

CCT129202

MB4002

TAK-901

MB4027

Alisertib (MLN8237)

CL-10420

AMG-900

MB4028

Barasertib (AZD1152-HQPA)

MB4004

CCT137690

MB3998

CYC116

MB3898

Danusertib (PHA-739358)

MB4530

ENMD-2076

MB4003

GSK1070916

MB4030

MK-5108 (VX-689)

CL-10418

MLN8054

CL-10267

PF-03814735

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1524 mL

10.7622 mL

21.5244 mL

5 mM

0.4305 mL

2.1524 mL

4.3049 mL

10 mM

0.2152 mL

1.0762 mL

2.1524 mL

50 mM

0.0430 mL

0.2152 mL

0.4305 mL

• 丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶催化NADH的氧化，伴随着ATP的消耗，观察340 nm 处吸光值的降低。反应包括100 mM Tris (pH 为 8), 10 mM MgCl2, 2.2 mM ATP, 1 mM磷酸烯醇丙酮酸, 0.6 mg/ml NADH, 75 ml丙酮酸激酶, 105 ml 乳酸脱氢酶,和0.5 mM 基底肽(序列为EAIYAAPFAKKK)。加入足够的激酶开始反应，反应的激酶浓度达到30 nM，用微量滴定板分光光度计在30oC进行30分钟，观察吸收率的降低。通过加入3.75 μl 溶于100% DMSO的VX-680 或单独DMSO，获得抑制常数。按如下公式计算Ki值，Ki= IC50/(1+[S]/Kd),[S]=[ATP]=2.2 mM, Kd=70 μM。假定作用于野生型和H396P Abl 激酶域的Kd(ATP)为70 μM，计算以上各值。

细胞实验

• Cell lines:CAL-62细胞
• Concentrations:5-500 nM
• Incubation Time:4天
• Method:

对照组CAL-62细胞培养在二甲亚砜和DMSO中，实验组加入500 nM VX-680，处理1到5天。加入不同浓度(5到500 nM) Aurora抑制剂处理不同ATC细胞4天，用来测定VX-680作用于细胞增殖的剂量依赖性。细胞在温育结束前加30 mM BrdU标记，脉冲2小时。通过比色免疫分析使用细胞增殖ELISA试剂盒分析BrdU的合并率。通过比较VX-680处理的细胞和对照组细胞得到结果，

动物实验

• Animal Models:右侧腋窝处皮下注射107 HL-60白血病细胞的雌性无胸腺NCr-nu鼠
• Formulation:50 mM含50% PEG300的磷酸buffer
• Dosages:50 mg/kg, 75 mg/kg
• Administration:腹腔注射