Sorafenib

Sorafenib是Raf-1,B-Raf和VEGFR-2的多重激酶抑制剂，无细胞试验中IC50分别为6 nM, 22 nM和90 nM。

靶点

体外研究

Sorafenib抑制野生型和V599E突变型B-Raf活性，IC50分别为22 nM 和 38 nM。Sorafenib也能有效抑制mVEGFR2 (Flk-1)，mVEGFR3，mPDGFRβ，Flt3，和c-Kit，IC50分别为15 nM，20 nM，57 nM，58 nM，和68 nM。Sorafenib 能够较弱地抑制FGFR-1，IC50 为580 nM。Sorafenib对ERK-1，MEK-1，EGFR，HER-2，IGFR-1，c-Met，PKB，PKA，cdk1/cyclinB，PKCα，PKCγ，和pim-1没有活性。Sorafenib显著抑制NIH 3T3细胞中VEGFR2磷酸化，IC50 为 30 nM，也会抑制HEK-293细胞中Flt-3磷酸化，IC50 为20 nM。Sorafenib有效阻断大多数细胞中MEK 1/2 和 ERK 1/2磷酸化，但不阻断A549 或 H460细胞中该过程，同时不影响PKB通路的抑制。Sorafenib抑制HAoSMC 和 MDA-MB-231细胞的增殖，IC50分别为0.28 μM 和 2.6 μM。除了抑制RAF/MEK/ERK信号通路，Sorafenib tosylate显著抑制eIF4E的磷酸化作用，并以MEK/ERK依赖的方式下调肝癌(HCC)细胞中Mcl-1水平。Sorafenib 抑制PLC/PRF/5 和HepG2细胞的增殖，IC50分别为6.3 μM 和 4.5 μM，并诱导显著的细胞凋亡。

体内研究

Sorafenib(~60 mg/kg)口服给药，对各种人肿瘤异种移植模型，包括MDA-MB-231，Colo-205，HT-29，DLD-1，NCI-H460，和A549表现出广谱的、剂量依赖性抗肿瘤活性，而没有毒性。与抗肿瘤功效相联系，Sorafenib 治疗有效抑制HT-29 和 MDA-MB-231异种移植物中MEK 1/2磷酸化和pERK 1/2水平，但对Colo-205异种移植物没有作用，并且也能显著抑制MDA MB-231，HT-29 和 Colo-205肿瘤异种移植物中肿瘤微血管面积(MVA)和微血管密度(MVD)。在SCID小鼠体内，Sorafenib治疗对PLC/PRF/5肿瘤异种移植产生剂量依赖性生长抑制，10 mg/kg和30 mg/kg剂量下，TGIs分别为49%和78%，与ERK 和 eIF4E磷酸化抑制，微血管面积减少，和肿瘤细胞凋亡的诱导相一致。Sorafenib通过下调NF-κB介导的Mcl-1 和 cIAP2表达的作用机制使bax-/-细胞对TRAIL剂量依赖性敏感。 Sorafenib (30-60 mg/kg) 与 TRAIL (5 mg/kg)结合对TRAIL抗性HCT116 bax-/-和HT29肿瘤异种移植物表现出显著的功效。

MB1226

Sorafenib tosylate

1 mg

5 mg

10 mg

生化检测:
重组杆状病毒表达的Raf-1 (残基305–648)和 B-Raf (残基 409–765)以融合蛋白纯化。全长人MEK-1由PCR产生，并以大肠杆菌裂解物中的融合蛋白纯化。将Sorafenib加入到含Raf-1 (80纳克)，或B-Raf (80 纳克) 以及MEK-1 (1 微克) 混合物的实验缓冲液[20 mM Tris (pH 8.2)，100 mM NaCl，5 mM MgCl2，和0.15% β-巯基乙醇]中，DMSO终浓度为1%。加入25微升10 μM γ[33P]ATP (400 Ci/mol)启动Raf激酶试验(终体积50微升)，并在32 °C下培育25分钟。磷酸化的MEK-1通过过滤到磷酸纤维素板上采集，使用1%磷酸洗掉未结合的放射性。微波炉加热干燥后，使用β型板计数器量化过滤器结合放射性。人VEGFR2 (KDR)激酶域被表达，并从Sf9裂解物中纯化。VEGFR2的时间分辨荧光分析法能量转移测试在96孔不透明板中以时间分辨荧光分析法能量转移格式进行。最终反应条件如下：1 到10 μM ATP，25 nM poly GT生物素，2 nM 铕标记的磷酸(p)-酪氨酸抗体(PY20)，10 nM APC，1% DMSO 终浓度的1 到 7 nM 细胞质激酶域，50 mM HEPES (pH 7.5)，10 mM MgCl2，0.1 mM EDTA，0.015% Brij-35，0.1 毫克/毫升BSA，和0.1% β-巯基乙醇。反应体积为100微升，加入酶启动反应。反应启动~1.5 到 2.0小时后，板以615 和 665 nM在Perkin-Elmer VictorV多标记分析仪上读数。信号按如下比率计算：对每孔(665 nm/615 nM) × 10,000。对IC50的产生，在酶起始反应之前加入Sorafenib。50倍的库存板由Sorafenib在50% DMSO/50%蒸馏水溶液中连续稀释制得。最终Sorafenib在1% DMSO中的浓度范围为10 μM 到 4.56 nM。

细胞实验

• Cell lines:MDA-MB-231，和 HAoSMC
• Concentrations:溶解于DMSO，终浓度为~10 μM
• Incubation Time:72小时
• Method:细胞在逐渐增加浓度的Sorafenib下暴露72小时。细胞数通过Cell TiterGlo ATP发光测定试剂盒进行定量。该试验通过测定基于细胞中ATP量的发光信号，测量每孔中的活细胞。

动物实验

• Animal Models:雌性 NCr-nu/nu 小鼠，皮下植入MDA-MB-231，Colo-205，HT-29，H460，或 A549 细胞
• Formulation:以4倍(4 ×储备溶液，稀释为1 ×)溶解于聚氧乙烯蓖麻油/乙醇(50:50)
• Dosages:~60 mg/kg
• Administration:口服，每天一次