阿法替尼；Afatinib；BIBW2992
分子式：C24H25ClFN5O3 分子量：485.94
别名：Tomtovok；阿法替尼；BIBW2992；
(S,E)-N-(4-(3-chloro-4-fluorophenylamino)-7-(tetrahydrofuran-3-yloxy)quinazolin-6-yl)-4-(dimethylamino)but-2-enamide
物理性状及指标：
外观：……………………白色或类白色粉末
溶解性：…………………DMSO：97 mg/mL (199.61 mM)；Ethanol：15 mg/mL (30.86 mM)；Water：Insoluble
纯度：………………………>99%,BR,可用于细胞培养
储存条件：2-8℃，避光防潮密闭干燥
运输条件：常温运输
生物活性
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产品描述 |
Afatinib (BIBW2992)不可逆地抑制EGFR/HER2，包括EGFR(wt)，EGFR(L858R)，EGFR(L858R/T790M)和HER2，在无细胞试验中IC50分别为0.5 nM，0.4 nM，10 nM和14 nM。 |
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靶点 |
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体外研究 |
BIBW2992不可逆地抑制EGFR/HER2，在体外作用于野生型EGFR ,L858R突变型EGFR, L858R/T790M双突变型EGFR，及HER2时IC50分别为0.5, 0.4, 10, 14 nM。在体外实验中，BIBW2992不管作用于野生型EGFR/HER2还是突变型EGFR/HER2都显示出强大的活力，与gefitinib作用于L858R突变型EGFR的活力差不多，但是要比gefitinib作用于L858R-T790M双突变型EGFR的活力大100倍。在体外，BIBW2992有效抑制所有实验类型细胞的EGFR/HER磷酸化作用。比如人类扁平上皮癌A431细胞系表达的野生型EGFR,鼠类NIH-3T3细胞转染的野生型HER2 ,以及乳腺癌BT-474细胞系和胃癌NCI-N87细胞系表达的内源性HER2。 | ||||||||
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体内研究 |
活体研究时按实验对象体重，每千克口服20 mg BIBW2992持续25天，肿瘤产生明显的衰退现象，通过肿瘤切片的免疫组织化学染色观察发现，EGFR和AKT的磷酸化作用收到抑制。因此，正如lapatinib和neratinib, BIBW2992是次代酪氨酸激酶抑制剂，不可逆地抑制人类EGFR2（HER2）和EGFR激酶。BIBW2992不仅能和原代酪氨酸激酶如erlotinib和gefitinib一样有效抑制EGFR突变型，而且还能作用于抗erlotinib和gefitinib的EGFR。 |
用途及描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。阿法替尼是EGFR和人表皮生长因子受体2（HER2）酪氨酸激酶（TK）的下一代抑制剂。不同于第一代酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）的是，本品能够不可逆的于EFGR/HER2结合。
储液配置
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1 mg |
5 mg |
10 mg |
| 1 mM | 2.0579 mL | 10.2893 mL | 20.5787 mL |
| 5 mM | 0.4116 mL | 2.0579 mL | 4.1157 mL |
| 10 mM | 0.2058 mL | 1.0289 mL | 2.0579 mL |
| 50 mM | 0.0412 mL | 0.2058 mL | 0.4116 mL |
经典实验操作（仅供参考）
| 激酶实验 | 体外激酶活性实验: 人类EGFR和L858R/T790M双重突变型EGFR 的酪氨酸激酶区域与谷胱甘肽巯基转移酶区域相接，提取酪氨酸激酶区域的方法见补充说明。在有和没有BIBW2992时分别测定酶活。使用杆状病毒系统克隆HER2激酶，用类似提取EGFR激酶域的方法提取HER2激酶域。 |
| 细胞实验 |
细胞按1×104密度转移到96孔板上，在无血清培养基上过夜培养，用于EGFR磷酸化实验。第二天添加包含BIBW2992的混合物，培养基在37oC温育1小时。在室温下用100 ng/ml EGF刺激10分钟。细胞用冰冻PBS冲洗，然后每孔用120 μl HEPEX buffer萃取，然后在室温下震荡1小时。每孔中所有2×104细胞都用于HER2磷酸化实验。在涂有链霉亲和素的板上加用封闭液按1:100比例稀释的抗EGFR的生物素和c-erb2/HER2肿瘤蛋白Ab-5-生物素。上述步骤得到的萃取物转移到有抗体包被的孔中，室温下温育1小时。彩色显影的测法见补充说明，吸光度为450纳米。 |
| 动物实验 |
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