Miltefosine

Miltefosine作用于癌细胞系A431和HeLa，抑制PI3K/Akt活性，ED50分别为17.2 μM和8.1 μM，是第一个用于治疗内脏利什曼病的口服药物，有效对抗前鞭毛体和无鞭毛体。

靶点

体外研究

Miltefosine是一种烷基磷酸胆碱药，对各种寄生虫虫种，癌症细胞，以及一些致病菌与真菌均具有活性。Miltefosine抑制无细胞提取物中来自NIH3T3细胞的PKC ，IC50约为7 μM。Miltefosine以HIV感染的巨噬细胞为靶点，其在体内扮演长期的HIV-1储存库。Miltefosine通过抑制PI3K/Akt通路发挥作用，从而移除循环中感染的巨噬细胞，而不影响健康细胞。Miltefosine抑制癌细胞系中PI3K/Akt存活通路。Miltefosine通过干扰胰岛素信号通路，并抑制胰岛素刺激的葡萄糖摄取，引起体外骨骼肌胰岛素抵抗。Miltefosine剂量依赖性抑制胰岛素刺激的Akt磷酸化，40 μM下抑制75%，60 μM下抑制98%。

体内研究

Miltefosine抑制抗- IgE诱导的组胺从人皮肤肥大细胞的释放。Miltefosine能够减少某些皮肤组织细胞中的细胞因子IL-1β，IL-4，和IL-6，并强烈阻碍胆固醇的酯化反应

渥曼青霉素

MB1880

哌立福新(KRX-0401)

MB3649

曲西立滨

MB4498

AT13148

CL-10066

AT7867

MB3647

AZD5363

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4536 mL

12.2678 mL

24.5357 mL

5 mM

0.4907 mL

2.4536 mL

4.9071 mL

10 mM

0.2454 mL

1.2268 mL

2.4536 mL

50 mM

0.0491 mL

0.2454 mL

0.4907 mL

• 使用ApoAlert半胱天冬酶荧光测定试剂盒定量酶活性胱天蛋白酶-3的水平。 简而言之，用50μM米替福新，50μMPerifosine或20nM NVP-BEZ235以及相应的载体对照处理1×10 6 BC-1 PEL细胞。 收获细胞并在12小时后裂解。 将所有样品的等效微克细胞裂解物与荧光半胱天冬酶-3底物（DEVD-AFC）一起温育。 通过胱天蛋白酶-3裂解DEVD释放AFC，其荧光使用FLUOstar OPTIMA荧光计测量，激发和发射滤光器波长分别设定为400和505nm。

细胞实验

• 将米替福新（HePC）制备成含有10mM米替福新在20mM Tris-HCl，pH7.4中的储备溶液，并储存（-20℃），然后在使用前稀释。
• NIH3T3细胞在补充有10％FCS的DMEM中在95％空气和5％CO 2的潮湿气氛中生长。 将细胞以0.5-0.8×10 5个细胞/孔接种在35-mm培养皿（6孔板）上。 确定生长18-24小时并确定代表性孔的细胞数（时间0）。 通过向细胞或等体积的Tris-HCl添加新制备的给予浓度的米替福新溶液来开始实验以控制细胞。 孵育60小时后，用电子计数器计数细胞。 计算细胞增殖。

动物实验

• 将米替福新溶解在PBS（小鼠）中。
• 米替福新（MFS）制备为水溶液或MFS-脂质纳米胶囊（LNC）分散体（大鼠）。
• 老鼠
• 将PEL细胞在冰冷的磷酸盐缓冲盐水中洗涤，计数，并在100μL与100μL贫化生长因子的基质胶混合的PBS中稀释。将总共1×105至7.5×105个BC-1细胞皮下注射到NOD.CB17-Prkdcscid / J或CB17-Prkdcscid / J小鼠的右胁腹中。隔天监测小鼠的可触及肿瘤（2mm3）的发展，此时开始药物或媒介物治疗，并且每周5天腹膜内（哌立福辛）或通过口服强饲法（罗格列酮，NVP-BEZ235）施用。 。使用5至7只小鼠的组来产生PEL肿瘤并用载体或药物混合物处理。每个生物学实验重复多次。对于罗格列酮，使用0.25％甲基纤维素作为载体，并将30mg / kg或60mg / kg罗格列酮悬浮于甲基纤维素中。对于Perifosine和Miltefosine，PBS用作载体，50mg / kg Perifosine或Miltefosine溶解在PBS中。对于NVP-BEZ235，将化合物溶于1：9vol / vol的1-甲基-2-吡咯烷酮和聚乙二醇300的混合物中。给予40mg / kg剂量的NVP-BEZ235或等体积的载体。使用数字卡尺测量肿瘤直径，并计算肿瘤体积。切除肿瘤并在福尔马林中固定。使用线性模型拟合进行统计分析，其中最大可能性是将个体动物视为随机效应。
• 大鼠
• 将雄性Sprague-Dawley大鼠（体重270-290g）分成五组（n = 5）。治疗组中的大鼠通过胃管饲法以水溶液或MFS-LNCs分散体施用单次10mg / kg口服剂量的米替福新（MFS）。该剂量相当于在校正大鼠后在临床前研究中给小鼠施用的20mg / kg米替福新剂量。给药后，在麻醉下，在含有EDTA的Eppendorf管中以0.5,1,2,4,7,10,24,48,72和216小时的时间间隔通过眼眶丛收集血液样品。然后将血液样品立即以4000rpm离心10分钟。将血浆样品冷冻并保持在-80℃待分析。