TAE684

TAE684 (NVP-TAE684)是一种有效的，选择性ALK抑制剂，在无细胞试验中IC50为3 nM，作用于ALK比作用于InsR选择性高100倍。

特性

NVP-TAE684 作为治疗难治愈和复发的ALK阳性淋巴癌的一种策略，但是还没进行临床实验。

靶点

体外研究

NVP-TAE684选择性有效抑制ALK激酶，作用于其他激酶则没有明显的交叉反应。NVP-TAE684 有效抑制Ba/F3 NPM-ALK 细胞增殖，IC50 为3 nM, 1 μM NVP-TAE684对Ba/F3 细胞存活没有效果。NVP-TAE684 也抑制表达NPM-ALK人类ALCL细胞系的增殖，包括Karpas-299和SU-DHL-1，IC50为2-5 nM。分子模型显示L258 可能为NVP-TAE684的主要激酶选择性影响因素之一。用NVP-TAE684处理，快速且持久地抑制NPM-ALK的磷酸化作用。NVP-TAE684 作用于表达NPM-ALK的 Ba/F3 细胞和ALCL病患细胞系，诱导细胞凋亡，且使细胞周期停在G1期。NVP-TAE684 作用于H3122 CR细胞，显著克服细胞抗Crizotinib的特性, 含有融合致癌基因EML4-ALK, 降低细胞生长，抑制ALK磷酸化作用和诱导细胞凋亡。30 nM NVP-TAE684可抑制mALK R1279Q 突变表达诱导的神经突增生。

体内研究

3和10 mg/kg NVP-TAE684处理4周后,明显减慢淋巴癌生长转移，作用于Karpas-299淋巴癌模型没有毒性。用NVP-TAE684处理Karpas-299 淋巴癌也诱导疾病衰退和下调CD30表达。NVP-TAE684 作用于H3122 CR移植瘤显示出明显的抗癌活性。用NVP-TAE684处理也提升ALK突变的表现型,尤其是ALKR1275Q, 然而Crizotinib 对表现型没有影响。

体外酶实验:
使用同质时间分辨荧光法测定NVP-TAE684作用于InsR和IGF1R的IC50 值。ATP (10 mM)和20 mg/ml 生物素PolyEY (Glu, Tyr 4:1)，与50 nL NVP-TAE684连续稀释液 (10-500 nM) ，和4 ng InsR 酶，和激酶反应buffer (包括20 mM Tris×HCl, pH 为7.5 /10 mM MgCl2/3 mM MnCl2/1 mM DTT/10 mM NaVO4/0.1 mg/ml of BSA)混合。在室温下温育1小时。加入10 mL检测液终止反应，检测液含50 mM EDTA, 500 mM KF, 0.5 mg/ml of BSA, 5 mg/ml Eu3+穴状化合物标记的磷酸酪氨酸抗体PT66-K,及5 mg/ml 链霉亲和素-XLent。反应进行半小时，在Analyst GT上读取荧光信号。

细胞实验：

Cell lines:表达Luciferase的Karpas-299, SU-DHL-1,和Ba/F3 细胞，及稳定表达Ba/F3转变的 NPM-ALK, BCR-ABL,或TEL激酶融合构成。

• Concentrations:1 nM-10 μM
• Incubation Time:2到3天
• Method:细胞按每孔2.5×104个接种在384孔板上，和NVP-TAE684的连续稀释液或DMSO温育2到3天。使用Luciferase表达系统测定细胞增殖和存活，然后用Bright-Glo Luciferase 实验系统测评。使用XLFit 软件测定IC50值。

动物实验：

Animal Models:4到6周大的携带Karpas-299移植瘤的雌性Fox Chase SCIDBeige 鼠

• Formulation:再悬浮在10% 1-甲基-2-吡咯烷酮/90%聚乙烯乙二醇300溶液中
• Dosages:1, 3, 和 10 mg/kg
• Administration:每天口服饲喂，持续3周。