MBX-2982

产品描述

MBX-2982是一种选择性的、可用的G蛋白偶联受体119 (GPR119)激动剂。

靶点&IC50

GPR119

体外研究

在预处理的细胞中，在“慢性孵育/洗涤”实验中，与对照细胞相比，由IMPX夹杂物捕获的cAMP积累显著增加（P＜0.01；ANOVA；n＝3-6），尽管广泛洗涤以除去过量激动剂。AR-23 1453在与急性刺激（小的1.82倍移位）观察到的相似浓度范围内产生持续的响应，PEC50S分别为8.67±0.11和8.93±0.17。同样，观察到的浓度响应（57.54倍）的大但不太严重的变化，其持续和急性PEC50的7.03±0.13和8.79±0.12.

体内研究

为了检查GLUTag和原代肠细胞的观察是否具有生理相关性，C57BL／6小鼠用GPR119激动剂MXX-9222以10 mg/kg的剂量处理。注意，为了检查直接GPR119效应，在本实验中不加入DPP-IV抑制剂，但DPP-IV抑制剂用于保存血液样品中的活性GLP-1。在没有葡萄糖负荷的情况下，从用MXX-292剂量的小鼠血浆GLP-1水平升高，表明GPR119介导的GLP-1分泌不依赖于葡萄糖。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2295 mL

11.1473 mL

22.2946 mL

5 mM

0.4459 mL

2.2295 mL

4.4589 mL

10 mM

0.2229 mL

1.1147 mL

2.2295 mL

激酶实验

用GeloSuror 22F质粒转染HEK-GPR119细胞，并在24～30h后进行动态cAMP测定。细胞悬浮液通过使用PBS洗涤和ACCututase-处理然后在培养基中再悬浮去除细胞。然后通过离心（300克，5分钟）和再悬浮在测定缓冲液（Hank的平衡盐溶液中加入20毫米HEPES和0.01%的无脂肪酸的BSA，pH 7.4）将细胞洗涤两次。然后将细胞计数并在缓冲液中稀释至600000个细胞/ml，然后加入GeloSoor cAMP试剂（2% V/V），并在20°C与细胞平衡2小时，并进行周期性混合。将50 L L／阱的细胞加入到白色底384孔板（30000个细胞/孔）中，并用EnVIEW平板阅读器测量基线发光。将5μL的MXX-992（在DMSO中连续稀释，然后稀释至1:100在测定缓冲液中获得×10浓缩液），手动加入到测定威尔斯中，以达到所述最终浓度。平板在20°C孵育，发光以规则间隔读取，以检测同一威尔斯内随时间变化的动态cAMP变化。在每个时间点的cAMP响应被表示为折叠过度控制（车辆处理的细胞）。

细胞实验

在DMSO中连续稀释BMX-922，然后在测定缓冲液中稀释1:100，得到×10浓缩溶液。

HEK-GPR119细胞生长在瓶中汇合，细胞悬浮液通过使用PBS洗涤和ACCututase-处理然后在培养基中再悬浮去除细胞。然后，通过离心（227克、7分钟、20°C）将细胞洗涤两次，再在温热缓冲液中再悬浮（Hank的平衡盐溶液加上20毫米HEPES和0.01%无脂肪酸的BSA，pH 7.4），在第二次洗涤后37℃孵育5分钟。然后将细胞计数并稀释到200000个细胞/ml中，在温热试验缓冲液中。

动物实验

准备：MXX-922溶于15%聚乙二醇400 + 85%的23.5%羟丙基-β-环糊精。

动物：小鼠

使用C57BL／6雄性小鼠。通宵禁食，10周龄雄性小鼠（每组20只）通过口服灌胃给药（15%聚乙二醇400 + 85%的23.5%羟丙基-β-环糊精）或MXX-992 10 mg/kg。半数动物（每组10只）在复合给药30分钟后被CO2窒息杀死，并通过心脏穿刺收集血液。为了保持活性的GLP-1，将DPP-IV抑制剂（每1毫升血液中的10μL）预先添加到采血管，并且在心脏穿刺之前，用DPP-IV抑制剂冲洗注射器的壁。另一半动物（每组10只）在复合给药后30分钟口服口服葡萄糖（3 g/kg），并在葡萄糖负荷后10分钟处死以采血。用活性GLP-1（VER 2）试剂盒测定血浆样品中的GLP-1水平。