RI-1

RI-1是RAD51抑制剂，IC50为5至30 µM。

特性

A selective recombinant RAD51 protein inhibitor discovered in 2012. Valuable tool for mechanistic studies of DNA repair and potential for use in many cancers.

靶点

体外研究

RI-1通过直接和特异破坏HsRAD51和抑制RAD51，形成对单链DNA细丝的能力，提高细胞对DNA损伤的敏感性。此外，在所有三种癌细胞株（HeLa细胞，MCF-7和U2OS）中，RI-1单独产生单剂毒性，LD50值在20-40微米范围内。RI-1减少了在G2期细胞的γ-H2AX灶，并导致在辐射6小时后未修复DNA双链断裂的升高。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7654 mL

13.8271 mL

27.6541 mL

5 mM

0.5531 mL

2.7654 mL

5.5308 mL

10 mM

0.2765 mL

1.3827 mL

2.7654 mL

50 mM

0.0553 mL

0.2765 mL

0.5531 mL

DNA结合检测:
所有反应均在黑色非结合性聚苯乙烯384孔板中进行，反应体积为30-100微升。纯化的DNA链交换的蛋白质和化学化合物预先在室温下孵育5分钟；然后进一步在37 ℃下孵育30分钟，使用100nM的单链DNA底物，它由在5’末端Alexa 488标签的45 -聚体的多-dT（合成并通过综合的DNA技术进行纯化）组成。反应在20 mM HEPES （pH值7.5）， 10毫摩尔氯化镁，0.25 μM BSA，2％甘油，30 mM氯化钠，4％DMSO和2毫摩尔ATP中进行。有些条件包括DTT或TCEP （三（2-羧乙基）膦）所指示。DNA结合是在Safire2酶标仪中测量荧光偏振（FP），使用以下设置：激发470 ± 5 nm，发射530 ± 5 nm，10测/孔，Z轴高度和G因子从对照孔自动校准。显示误差棒表示标准偏差。涉及蛋白质浓度的滴定实验中，数据拟合到该帐户用于协同性质由重组酶蛋白与DNA结合的方程式。对于涉及RI- 1的滴定实验中，蛋白质浓度为在不存在RI- 1得到的FP信号的〜80％的饱和度。

细胞实验：

• Cell lines:HeLa, MCF-7和U2OS细胞
• Concentrations:~35 μM
• Incubation Time:24 小时
• Method:细胞毒性是通过克隆形成能力的损失来确定。实验一式三份进行。结晶紫染色的菌落用CCD照相机成像，并使用NIH图像软件计数。误差线表示标准误差