Ridaforolimus (Deforolimus, MK-8669)

Deforolimus (Ridaforolimus MK-8669)是选择性的mTOR抑制剂，IC50为0.2 nM;但没分类为一种前体药物，抑制mTOR信号通路及与FKBP12结合与Rapamycin相似。

靶点

mTOR

IC50

0.2 nM

体外研究

使用Deforolimus处理HT-1080细胞，抑制S6和4E-BP1磷酸化,这种作用存在剂量依赖性，IC50分别为0.2 nM和5.6 nM, EC50分别为0.2 nM和1.0 nM,且导致细胞尺寸降低，G1期细胞增多,和抑制葡萄糖摄取，EC50为0.1-1 nM。Deforolimus作用于一组细胞系，具有显著抗增殖活性，EC50为0.2-2.3 nM。Deforolimus有效且选择性抑制VEGF产量，这种作用存在剂量依赖性，EC50为~0.1 nM。Deforolimus作用于人NSCLC细胞系（除了H157细胞），显著抑制细胞生长，IC30为2.45-8.83 nM,而作用于H157细胞时，IC30 >20 nM。2.8-5.9 nM Deforolimus处理A549, H1703和H157细胞（除了表达mTORC1耐药变异的H1666），使p70S6KThr389去磷酸化,且作用于A549和H1703细胞，提高pAKTser473和pAKTThr308磷酸化水平。Deforolimus和MEK抑制剂CI-1040或PD0325901联用处理人肺癌细胞系，具有协同作用，这种作用存在剂量依赖性，这种作用与细胞增殖受抑制而不是细胞死亡增多相关，处理24小时后，抑制40%核糖体合成，且使多核糖体/染色单体比例下降。

体内研究

Deforolimus处理携带PC-3 (前列腺), HCT-116 (结肠), MCF7 (胸腺), PANC-1 (胰腺)或A549 (肺)移植瘤的小鼠，具有显著抗癌效果，这种作用存在剂量依赖性，且作用于SK-LMS-1移植瘤，抑制mTOR信号。

AZD8055

MB1596

BEZ235 (Dactolisib)

MB1197

Rapamycin(Sirolimus)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.0099 mL

5.0494 mL

10.0989 mL

5 mM

0.2020 mL

1.0099 mL

2.0198 mL

10 mM

0.1010 mL

0.5049 mL

1.0099 mL

50 mM

0.0202 mL

0.1010 mL

0.2020 mL

激酶实验:
用浓度不断提高的 Deforolimus (0-100 nM)处理HT-1080细胞2小时，然后收集。在变性裂解buffer中抽屉细胞裂解液, 在SDS-PAGE上分析，然后转移到PVDF膜上。阻断后,膜和一抗在室温下温育1小时，随后和适当的HRP联合二抗再温育1小时。使用增强化学荧光法，及X-光片进行曝光自显影，而测定免疫蛋白。通过抑制磷酸化的核糖体蛋白S6(p-S6)和4E-BP1(p-4E-BP1)水平而测定IC50值。

细胞实验：

• Cell lines:Colo205, H1755, H1395, H1666, A549, H157,和H1703
• Concentrations:溶于乙醇,终浓度为1 μM
• Incubation Time:72-120小时
• Method:细胞按2到3×104/mL接种, 2小时后加入梯度稀释的Deforolimus，结果至少三组细胞倍增(72-120小时)。使用CellTiter 96 AQueous 非放射性增殖实验和Sulforhodamine B实验测定Deforolimus作用效果。对于Deforolimus，增长效应被描述为IC30，因为Rapamycin和其衍生物不显著抑制细胞增殖。

动物实验：

• Animal Models:皮下移植PC-3, A549, HCT-116, MCF7, PANC-1和 SK-LMS-1肿瘤的雄性和雌性无胸腺NCr-nu小鼠。
• Formulation:溶于乙醇 ,然后在4% 乙醇, 5% Tween-80, 和5% 丙二醇中稀释
• Dosages:~10 mg/kg
• Administration:腹腔注射