AZD5363

AZD5363有效抑制Akt(Akt1/Akt2/3)的所有亚型，IC50为3 nM/8 nM/8 nM,对P70S6K/PKA也具有相似的抑制效果，对ROCK1/2具有较低的抑制活性。

靶点

体外研究

AZD5363是有效的Akt抑制剂，抑制Akt1, Akt2和Akt3时，IC50分别为3 nM, 8 nM和8 nM。PIK3CA突变的激活，肿瘤抑制基因PTEN的丢失或失活，或HER2的扩增，都与AZD5363有着显著的关系。此外，还可以看出细胞系的RAS突变状态与抗AZD5363之间的相关性。AZD5363在细胞中抑制AKT底物的磷酸化，效价约为0.3〜0.8μM。AZD5363抑制182种实体和血液肿瘤细胞系中的41种细胞增殖，效价为< 3 μM

体内研究

AZD5363按100, 300 mg/kg剂量口服给药裸鼠，降低BT474c移植瘤中PRAS40, GSK3β,和S6的磷酸化，这种作用具有剂量和时间依赖性，也可逆性地增加血糖浓度，且降低U87-MG移植瘤中2[18F]氟-2-脱氧-d-葡萄糖(18F-FDG)的摄取，这种作用存在剂量依赖性。AZD5363按130, 200,和300 mg/kg剂量慢性口服给药从各种肿瘤类型衍生的移植瘤，包括抗Trastuzumab的HER2+乳腺癌模型，抑制移植瘤的生长，这种作用存在剂量依赖性。AZD5363在乳腺癌移植瘤中也显著增强Docetaxel, Lapatinib,和Trastuzumab的抗肿瘤活性。

Ipatasertib(GDC0068)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3314 mL

11.6572 mL

23.3144 mL

5 mM

0.4663 mL

2.3314 mL

4.6629 mL

10 mM

0.2331 mL

1.1657 mL

2.3314 mL

50 mM

0.0466 mL

0.2331 mL

0.4663 mL

Caliper Off-Chip Incubation迁移率变动分析:
通过 Caliper Off-Chip Incubation迁移率变动分析测评AZD5363和其他化合物抑制AKT1, AKT2, 和 AKT3活性的能力。活跃的重组AKT1，AKT2，或AKT3与5-FAM标记的定制合成的肽底物，及浓度不断增加的抑制剂温育。最终反应包含1 到 3 nM AKT1, AKT2, 或AKT3 酶; 1.5 mM 肽底物; AKT亚型的ATP为Km; 10 mM MgCl2, 4 mM DTT, 100 mM HEPES, 及0.015% Brij-35。反应在室温下温育1小时，然后加入含100 mM HEPES, 0.015% Brij-35 溶液, 0.1% 涂层试剂， 40 mM EDTA, 和5% DMSO的buffer终止反应。使用Caliper LC3000分析实验板，进行肽底物的分离，对磷酸化的产物进行电泳和激光诱导荧光的检测和量化。

细胞实验：

Cell lines:182种实体和血液肿瘤细胞系

• Concentrations:0.003 μM-30 μM
• Incubation Time:72 小时
• Method:通过MTS和Sytox Green2种方法测定细胞增殖实验。细胞接种在96孔板中，在37°C下,含 5% CO2的环境中温育过夜。使用浓度为30 到 0.003μM的 AZD5363处理细胞72小时。对于MTS端点，通过CellTiter AQueous非放射性细胞增殖检测试剂测量细胞增殖。对于Sytox Green 端点，在TBS-EDTA buffer 中稀释的Sytox Green核酸染料加到细胞中（终浓度为0.13μM），使用Acumen Explorer测定死亡细胞数。通过加入Saponin（终浓度0.03％，在TBS-EDTA buffer中稀释）使细胞具有渗透性，温育过夜，并测量总细胞数。MTS 和Sytox Green 端点都是给药前测量，使用吸光度读数（MTS）或活细胞计数测定将实验组细胞的生长降低到未处理组细胞的一半所需要的浓度值。

动物实验：

Animal Models:携带 BT474c, U87MG, KPL-4, HCC-1187 移植瘤的雌性裸鼠和雄性SCID小鼠

• Formulation:溶于 10% DMSO 25% w/v Kleptose HPB
• Dosages:130 mg/Kg-300 mg/Kg
• Administration:口服处理