TWS119

TWS119是GSK-3β抑制剂，IC50为30 nM;能够诱导神经细胞的分化，有助于干细胞生物学的研究。

靶点

GSK-3β

IC50

30 nM

体外研究

使用1μM TWS119处理P19细胞，使30-40%细胞进行分化，尤其分化为神经细胞谱，根据正确的神经元形态(通过标准EB形成法，且伴随着TWS119处理，产生60%神经分化)计数TuJ1阳性细胞。TWS119与GSK-3β(KD=126 nM)紧密结合，通过表面等离子共振(SPR)量化，IC50为30 nM。TWS119作用于小鼠胚胎癌和ES细胞，有效诱导神经分化。TWS119处理肝星状细胞(HSC)，降低β-catenin磷酸化,诱导β-catenin核易位,提高谷氨酰胺合成酶产量，阻碍平滑肌肌动蛋白和Wnt5a合成,但促进胶质蛋白酸性蛋白, Wnt10b,和成对的同源结构域转录因子2c的表达。TWS119触发β-catenin的迅速累积，增强与寡核苷酸（含Tcf和Lef结合的DNA序列）的核蛋白相互作用，且大幅上调Tcf7, Lef1和其他Wnt靶点基因包括Jun, Ezd7(编码Frizzled-7), Nlk (编码Nemo样激酶)。TWS119提高T细胞特定杀伤力和与保护IL-2的产生能力相关的IFN-g释放。最新研究显示TWS119处理多克隆活化人类T细胞，诱导Wnt信号。与表达CD45RO(+)CD62L(-)效应表型的对照激活T细胞相比，这些T细胞具有天然CD45RA(+)CD62L(+)表型，这种作用存在TWS119剂量依赖性。

体内研究

TWS119按30 mg/kg计量处理细胞表面，细胞表达低水平CD44和高水平CD62L。

IM-12

MB4500

TDZD-8

MB3706

Tideglusib

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.1414 mL

15.7070 mL

31.4139 mL

5 mM

0.6283 mL

3.1414 mL

6.2828 mL

10 mM

0.3141 mL

1.5707 mL

3.1414 mL

50 mM

0.0628 mL

0.3141 mL

0.6283 mL

表面等离子体共振(SPR):
在BIAcore S51仪器上在 25oC 下在PBS buffer中测量SPR。GSK-3β-GST融合蛋白的相对光单位（11,000-17,000）通过EDC[1- 乙基-3-（3- 二甲基氨基丙基）碳二亚胺]耦合程序固定在S系列CM5生物传感器芯片上。GSK-3β稀释到温和酸性缓冲液 (10 mM KAc, pH 5.0)中，然后在浓度为20–200 μg/ml 时注射到传感芯片（事先使用 EDC (0.2 M) 和N-羟基丁二酰亚胺(NHS,0.05 M)的1:1混合物温育7分钟激活）中，注射7分钟。最后，通过注射7分钟乙醇胺(1 M, pH 8.5)，而阻断生物传感器矩阵的未反应位点。随后,注射TWS119 90秒，浓度不断提高(0, 2, 4, 8, 16, 32, 62.5, 125, 250, 500, 和 1,000 nM), 随后300秒，GSK-3β-TWS119 复合物解离。使用 S51评价软件包对SPR进行测评。在四种不同表面进行两组独立滴定实验的数据值，取平均。假设 1:1结合模型，用于测定热力学和动力学结合系数。

动物实验：

• Animal Models:Pmel-1 TCR-转基因小鼠和pmel-1 ly5.1 双转基因小鼠和 pmel-1 Thy1.1 双转基因小鼠
• Formulation:TWS119溶于DMSO
• Dosages:30 mg/kg
• Administration:腹腔注射