YO-01027(Dibenzazepine)

Dibenzazepine (YO-01027)是一种二肽γ-secretase抑制剂，作用于APPL和Notch分裂， 无细胞试验中IC50分别为2.6 nM和2.9 nM。

靶点

体外研究

YO-01027直接与γ-分泌酶复合物相互作用，并靶向作用于N-端早老素片段。逐渐增加浓度的YO-01027对表达APPL或Notch的细胞给药，导致APPL CTF片段逐渐积累，并完全地剂量依赖性减少NICD产生。10 μM YO-01027减少乳腺癌干细胞(BCSC)数量和活性。一项最近的研究表明，YO-01027通过Notch抑制，浓度依赖性削弱融合前和融合阶段未分化细胞中黏蛋白MUC16的生物合成，但是在有丝分裂后不同阶段的细胞中无此作用。

体内研究

YO-01027，在细胞注射的当天和随后的3天以1 mg/mL的剂量腹腔注射，显著减少MCF7肿瘤，而对MDA-MB-231肿瘤没有作用，与对照组小鼠(18-28天)相比，也会增加潜伏期。YO-01027处理MCF7肿瘤，会显著减少肿瘤体积。YO-01027对C57BL/6小鼠进行处理，抑制上皮细胞增殖，并剂量依赖性诱导肠腺瘤中杯状细胞分化。

DAPT (GSI-IX)

MB3697

LY411575

MB3694

Semagacestat (LY450139)

MB3695

MK-0752

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1576 mL

10.7880 mL

21.5759 mL

5 mM

0.4315 mL

2.1576 mL

4.3152 mL

10 mM

0.2158 mL

1.0788 mL

2.1576 mL

50 mM

0.0432 mL

0.2158 mL

0.4315 mL

γ-分泌酶活性的药理学抑制:
对于YO-01027，先导实验通过范围为0.1 nM到250 nM的不同药物浓度进行，以测定YO-01027的有效线性范围和最大抑制剂量。采集蛋白质6小时之前，根据Notch 或 APPL表达的诱导， YO-01027以所需浓度加入S2细胞培养基。对于每个样品，YO-01027 也以相应浓度在裂解缓冲液中，用于蛋白质萃取和免疫印迹分析。

细胞实验：

• Cell lines:BCSC
• Concentrations:10 μM
• Incubation Time:3天
• Method:细胞以≤1 × 106重悬浮在100μL分类缓冲液中(包含0.5%牛血清的PBS，2 mM EDTA)，并与结合前初级抗体BEREP4-FITC (1:10)，CD44-APC (1:20)，和CD24-PE (1:10)在4 °C下培育10分钟。将细胞在PBS中洗涤，在800×g下离心2分钟。对于分析，细胞重悬浮在500μL分类缓冲液中，荧光性使用FACSCalibur测量，并使用WinMIDI 2.8分析。对于分类，细胞与初级抗体培育后，重悬浮在1×HBSS中。HBSS作为鞘液，在16 p.s.i.下使用FACSAria对细胞进行分类。FACS分选出的CD24low细胞群是CD24阳性细胞加上所有CD24阴性细胞的五分之一。

动物实验：

• Animal Models:C57BL/6 小鼠
• Formulation:YO-01027悬浮在 0.5% (w/v) 羟丙基甲基纤维素 (甲基纤维素 E4M) 和 0.1% (w/v) Tween 80水溶液中
• Dosages:0，3，10，30 μmol/kg
• Administration:每天腹腔注射