LY2811376

LY2811376是第一个口服有效的，非肽类β-secretase(BACE1)抑制剂，IC50为239 nM-249 nM，可以减少Aβ分泌，EC50为300 nM，作用于BACE1比作用于BACE2选择性高10倍，比作用于其他天冬氨酸蛋白酶（包括Cathepsin D，胃蛋白酶和肾素）抑制效果高50倍以上。

特性

作用于BACE1的选择性是作用于BACE2的10倍。

靶点

体外研究

LY2811376对hBACE1表现出浓度依赖性抑制，对小分子合成肽或较大的嵌合蛋白底物IC50 分别为239 nM和249 nM。LY2811376治疗浓度依赖性降低APP过表达的HEK293细胞中Aβ分泌。LY2811376抑制Aβ分泌，在PDAPP转基因小鼠的神经元原代培养物中，EC50为~100 nM。

体内研究

在APPV717F小鼠Aβ病理模型中，LY2811376 (10，30，和100 mg/kg 剂量)给药导致Aβ，以及sAPPβ和C99剂量依赖性显著减少，Aβ，以及sAPPβ和C99是APP被BACE1蛋白水解的最接近的分解产物。LY2811376 (5 mg/kg)治疗后，在血浆中观察到Aβ1-x减少，比格犬体内给药4到12小时后能够观察到最大85%的下降。

LY2886721

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.1215 mL

15.6074 mL

31.2149 mL

5 mM

0.6243 mL

3.1215 mL

6.2430 mL

10 mM

0.3121 mL

1.5607 mL

3.1215 mL

50 mM

0.0624 mL

0.3121 mL

0.6243 mL

酶效能测定:
每种FRET多肽底物的储备溶液以30 mM在二甲基亚砜(DMSO)中制备。huBACE1:Fc muBACE1:Fc的制备通过YM10 Centricon浓缩，终浓度至少为7 mg/mL。对每种FRET多肽底物的最佳酶浓度分别以30μM FRET多肽底物在50 mM 乙酸铵，pH 4.6，1 mg/mL BSA 和1 mM Triton X-100中测定。BACE1直系同源物分别对15，30 和100μM 的FRET多肽底物的酶效能(kcat /Km)，在每种底物的最优条件下测定。反应的进程使用GEMINI荧光板阅读器，在320 nm激发波长下，通过测量420 nm下发射信号的增加进行监测。氨基酸偶联的对氨基苯甲酸用于将相对荧光单元的发射信号转化为反应混合物中产生的产物体积摩尔浓度。时间依赖性曲线的初始相拟合为线性函数，其斜率用于计算huBACE1:Fc对每种多肽底物的初始速率。kcat /Km值根据每种多肽浓度初始速率的线性关系计算。

细胞实验：

• Cell lines:APP-overexpressing HEK293.
• Concentrations:~ 100 μM
• Incubation Time:48–72 hours
• Method:在HEK293Swe细胞模型中的细胞毒性使用CellTiter 96 Aqueous非放射性细胞增殖试验评估。

动物实验：

• Animal Models:PDAPP转基因小鼠
• Formulation:7% Pharmasolve
• Dosages:10，30，和100 mg/kg剂量
• Administration:口服