AZD1080

AZD1080是一种口服生物有效的，选择性的，可透过大脑的GSK3抑制剂，抑制人类GSK3α和GSK3β，Ki分别为6.9 nM和31 nM，比作用于CDK2， CDK5， CDK1和Erk2选择性高14倍以上。

特性

A brain permeable GSK3 inhibitor.

靶点

体外研究

AZD1080是一种选择性，有口服活性，脑渗透性的GSK3抑制剂，抑制人GSK3α和GSK3β，Ki值分别为6.9 nM和31 nM，显示对CDK2，CDK5，CDK1和ERK2 >14倍的选择性。在表达人类tau蛋白的细胞中，AZD1080抑制tau蛋白磷酸化，IC 50为324 nM。

体内研究

口服AZD1080抑制大鼠脑中tau蛋白磷酸化，用脑/血浆浓度比在最高浓度时达到0.5-0.8。 在小鼠中，AZD1080逆转认知缺陷和挽救突触功能障碍。急性口服AZD1080抑制外围GSK3的活性，产生了剂量依赖性降低磷酸化糖原合成酶和总糖原合成酶（GS）的比率，在最高剂量（10微摩尔/千克）时达到平均最大抑制效果49％。

AR-A014418

MB4519

BIO-acetoxime

MB3793

GSK343

MB3813

GSK3787

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.9907 mL

14.9535 mL

29.9070 mL

5 mM

0.5981 mL

2.9907 mL

5.9814 mL

10 mM

0.2991 mL

1.4953 mL

2.9907 mL

50 mM

0.0598 mL

0.2991 mL

0.5981 mL

激酶检测:
GSK3的闪烁亲近测定法进行。在透明底的微量滴定板中进行竞争实验，复孔加入10个浓度梯度的抑制剂。生物素化的肽底物生物素- AAEELDSRAGS（ PO 3 H 2 ） PQL 加入检测缓冲液中达到终浓度2 μM，检测缓冲液含有6毫单位的重组人GSK3（ α和β的等量混合）， 12mM的MOPS， pH为7.0 ， 0.3 mM 的EDTA ，0.01％ β-巯基乙醇，0.004 ％的Brij 35 ， 0.5 ％甘油，和0.5微克牛血清albumin/25微升，预热10-15分钟。该反应通过在50mM醋酸镁中加入0.04 μCi [γ-33P]ATP和未标记的ATP至终浓度1μM和终体积25微升而起始。空白对照没有加入多肽底物。在室温孵育20分钟后，每个反应通过加入25微升含有5 mM EDTA ，50 μM ATP， 0.1 ％的Triton X -100，和0.25 mg的链霉抗-涂覆的SPA而终止。6小时后放射活性在液体闪烁计数器测定。

细胞实验：

• Cell lines:稳定表达4重复人tau的3T3成纤维细胞
• Concentrations:~20mM
• Incubation Time:0-8 小时
• Method:3T3成纤维细胞通过基因工程手段稳定表达四个重复tau蛋白。这些细胞具有GSK3β的高内源性水平，能够组成性磷酸化tau蛋白。这种磷酸化可通过氯化锂抑制。用不同的化合物处理后，培养物用5mM的氯化镁-PBS洗涤两次。提取物进行Western印迹分析通过在冰冷的提取缓冲液制备均质化细胞（20 mM HEPES，pH值7.4 ，100mM的氯化钠，10mM的氟化钠，1％的Triton X- 100，1 mM的原钒酸钠， 10mM EDTA，蛋白酶抑制剂（2 mM苯甲磺酰氟， 10微克/毫升抑肽酶， 10微克/毫升亮肽素，和10 μg/ ml的胃蛋白酶抑制剂）。将样品在4°C匀浆，通过Bradford法测定蛋白质含量。总蛋白（25微克）在10％SDS -PAGE凝胶上进行电泳，并转移到硝酸纤维素膜上。本实验用下列一抗进行： tau蛋白丝氨酸（P）-396，1:1000; Tau5，1:1000; 和抗GSK3β，1:1000。该过滤器是在5％脱脂奶粉孵育的抗体4℃孵育过夜。将第二抗体（1:5000）在加入ECL检测试剂用于免疫检测。免疫反应的定量是通过光密度扫描完成。

动物实验：

• Animal Models:C57BL/6小鼠
• Formulation:0.5％抗坏血酸，0.01％EDTA，pH 2.0的水溶液
• Dosages:3 or 10 μmol/kg, 6 mL/kg
• Administration:口服灌胃